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[求助]
基因測(cè)序
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| 問一下，基因測(cè)序的時(shí)候使用的是多個(gè)細(xì)胞的混合物？擴(kuò)增的是DNA雙鏈還是單鏈？一般擴(kuò)增多少倍？你們測(cè)得片段的序列后進(jìn)行拼接嗎？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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我們一起: 金幣+10, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2014-04-20 11:27:22
我們一起: 金幣+10, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2014-04-20 11:27:22
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擴(kuò)增的DNA肯定是雙鏈了 一般擴(kuò)增25-35個(gè)循環(huán)吧，具體倍數(shù)沒算過，估計(jì)是幾十萬倍以上。 sanger測(cè)序一般每個(gè)反應(yīng)能測(cè)出500-800bp，看你的片段長(zhǎng)度了，如果超過這個(gè)范圍，可能需要測(cè)好幾個(gè)反應(yīng)，然后拼成全序列。另外sanger測(cè)序都是前500bp準(zhǔn)確性比較高，后面的準(zhǔn)確性會(huì)稍微降低點(diǎn)。假如你有個(gè)1200bp的產(chǎn)物，可以從兩頭各測(cè)800bp，然后靠中間重復(fù)的400bp來將序列拼完整，這樣得到的序列非常準(zhǔn)確。 |
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我們一起2樓2014-04-20 08:08:42
3樓2014-04-20 11:27:16
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