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lccun8

鐵蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 心肌炎和心肌病

[交流] D-Hanks 中酚紅的作用，它的PH值是多少

1、酚紅(Phenolsulfonphthalein )別名苯酚磺酞是一種常用的酸堿指示劑，在pH為6.6—8.0之間顯示橙色，pH低于6.6呈現黃色，pH高于8.4呈現紅色。
2、你應該用PH試紙試一下真實的PH有沒有變化，如果變了可以加碳酸氫鈉。
3、我們配D-HANKS從來不加酚紅。
4、加不加都可以，據說加葡萄糖可以營養(yǎng)一下細胞，但是加葡萄糖后不能高壓滅菌，不能超過110度，8磅超過后高壓會羥化，液體會變成淡黃色。

5、其中磷酸二氫鈉是否帶結晶水，可以根據總共需要多少磷酸二氫鈉來換算。
Na2HPO3的分子量是126
Na2HPO3·12H2O的分子量是126+216=342
Na2HPO3·12H2O中含Na2HPO3為126/342
如果將Na2HPO3·12H2O換算成Na2HPO3用乘法.例如34.2克Na2HPO3·12H2O中含有Na2HPO3多少克？
34.2×126/342=12.6克
如果將Na2HPO3換算成Na2HPO3·12H2O用除法。例如題目中3.55g的無水磷酸氫二鈉換算成十二水合的磷酸氫二鈉的質量是多少克?
3.55÷126/342=3.55×342/126=9.636克

Hanks液可以維系細胞正常滲透壓與pH，本文主要記錄了動物細胞培養(yǎng)中Hanks液、D-Hanks液和消化液(胰酶液)的配制方法及其注意事項。
hanks液可以維系細胞正常滲透壓與pH，本文主要記錄了動物細胞培養(yǎng)中Hanks液、D-Hanks液和消化液(胰酶液)的配制方法及其注意事項。
動物細胞培養(yǎng): hanks、D-Hanks液和消化液(胰酶液)的配制
實驗目的：熟練掌握Hanks、D-Hanks液等平衡鹽溶液的配制，了解消化液(胰酶液)的配制方法。
實驗原理：Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液。BSS與細胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無菌狀態(tài)一致，且配方簡單，是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗細胞等，細胞在BSS中可生存幾個小時。胰蛋白酶(胰酸)溶液是一種常用的細胞消化液，原代培養(yǎng)時用于處理組織塊，使細胞分離下來。傳代時用胰蛋白酶使培養(yǎng)細胞離開所貼附的培養(yǎng)瓶表面，并分散成單個細胞。胰蛋白酶主要采自牛或豬的胰臟，呈白色粉末狀，易潮解，應在低溫干燥處保存。胰酶的活力常用一份胰酶解離酪蛋白的份數表示，常用胰酶活力為1：125或1：250。本實驗室一般用1：250(GRC公司生產)。胰蛋白酶對細胞的分離效果與細胞的類型、特性和瓶壁表面特性有關。一般來說濃度大、溫度高(勿高于37℃)、作用時間長，則對細胞分離能力大。但超過一定程度會損傷細胞，導致細胞傳代后不能貼壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃時消化能力最強。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清會降低胰酶活力，所以配制胰酶時須用無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。當消化結束時，可加入少量血清或含血清的培養(yǎng)基以終止胰酶作用。細胞傳代使用的胰酶濃度是0.25%或0.2%。用于原代細胞培養(yǎng)消化組織塊則為0.1%或0.125%。
實驗材料與用品
***材料：3 000 mL錐形瓶，25 mL、50 mL試劑瓶，500 mL輸液瓶，螺口蓋，翻帽塞，pH試紙，孔徑0.22μm的微孔濾膜。
***藥品：NaCl，Na2HP04，KH2P04，KCl，酚紅，NaHC03，胰蛋白酶干粉，0.02%EDTA，CaCl2，D-葡萄糖，MgCh·6H20，MgS04·7H20，酚紅(0.1%)(配法：稱酚紅2 g，置于研磨器中，先用數滴5.6%的NaHCO3溶液溶解并研磨，再加進該5.6%NaHC03溶液使最終體積為100 mL。瓶裝保存，備用)。
***儀器(請參看儀器圖庫)：抽濾泵1套，過濾器1套，高壓滅菌鍋，量筒，磁力攪拌器，研磨器。
實驗步驟
(一)配制D-Hanks液
1.按表2—3—5稱取D-Hanks試劑。
2.依次加入上述試劑至800 mL蒸餾水中，溶解后定容至1 1000 mL。 3.高壓滅菌，10磅10 min。

(二)配制Hanks液
1.按表2—3—5稱取Hanks試劑。
2.配制Hanks時，需將CaCl2另溶解于100 mL的蒸餾水中。
3.依次加入上述試劑至700 mL蒸溜水中，溶解后再與CaCl2溶液一起定容至1 000 mL。
4.10磅，10 min高壓滅菌。
(三)配制胰蛋白酶消化液
1.D.Hanks液高壓滅菌之后，晾至室溫，4℃保存?zhèn)溆谩?

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1樓 2014-04-21 10:52:14

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