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western 已有2人參與
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最近做的western在hrp曝光時，一直是曝光兩分鐘有條帶，四分鐘條帶變?nèi)�，十分鐘甚至再延長時間就沒有條帶了請問這是什么原因？ 我用的是thermo的發(fā)光液，一抗用的是cst和康為世紀的his標簽抗體，稀釋倍數(shù)為1：2000至1：3000；二抗為promega 的鼠抗和兔抗，稀釋倍數(shù)試過10000倍和5000倍，之前用10000倍稀釋用著一直挺好使的。顯影液和定影液用過碧云天的以及國產(chǎn)的顯影粉新配的都是這樣的結(jié)果。 求賜教！ |
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kueradi
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- 專業(yè): 細胞死亡
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 這個應(yīng)該是熒光淬滅問題。有可能是①二抗?jié)舛冗^高？②ECL有問題？ECL試劑盒應(yīng)該有A液和B液。在取A液和B液的時候如果忘了換槍頭，導(dǎo)致AB液之間有污染，容易造成熒光淬滅的。我的ECL是在4度存放，用的時候要嚴格避光的。③發(fā)光過程中使用的東西和操作有無變化。熒光較敏感，保鮮膜干凈否，操作過程中鑷子干凈否，是否碰到熒光，或者其他吧。④實驗室有人曝光時把紅光調(diào)太亮，感覺也會淬滅。我還沒調(diào)太亮過。感覺ECL質(zhì)量或者污染出問題的概率一般大一些。 |
hf20162樓2014-04-21 22:48:59
3樓2014-04-22 08:53:59
daibingling
鐵蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 藥物分析
4樓2014-04-22 15:55:05
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