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一旺百旺新蟲 (著名寫手)
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[求助]
羅丹明123染色檢測(cè)膜電位， 已有1人參與
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我是在12孔板里鋪板的，然后藥物處理完了，現(xiàn)在問題是接下來具體怎么操作？ 我們這里有熒光顯微鏡，說明書里寫的是黃綠色光，那濾光片選擇啥顏色的比較好呢？綠的？紫的？黃的？還是啥？我直接PBS洗了以后，加了羅丹明123稀釋液，37攝氏度避光30min，然后在六孔板里直接觀察，但是不知道是自己調(diào)的還是怎么回事就是調(diào)節(jié)不出來好的圖像。然后嘗試了，用細(xì)胞刮把細(xì)胞刮下來，然后滴到了載玻片上，觀察也是效果不好。。。然后加了點(diǎn)多聚甲醛固定一下，15min吧，然后洗一下，然后觀察，感覺細(xì)胞很少很少，沒有幾個(gè)細(xì)胞，可能洗都洗沒了。。。 我看文獻(xiàn)有的是胰蛋白酶消化處理以后，PBS洗，之后染色，然后直接檢測(cè)流式 也有的是96孔板里鋪板，然后96孔板洗后，96孔板里染色，洗，然后直接熒光分光光度計(jì)測(cè)，問題是我們這只有酶標(biāo)儀，酶標(biāo)儀可以用？如果可以的話那波長(zhǎng)怎么設(shè)置，酶標(biāo)儀只有一個(gè)設(shè)置波長(zhǎng)，不知道是激發(fā)還是發(fā)射波長(zhǎng)，但是羅丹明的介紹里有一個(gè)是激發(fā)一個(gè)是發(fā)射，如果用酶標(biāo)儀測(cè)的話，應(yīng)該怎么設(shè)置波長(zhǎng)呢？？？？？還是酶標(biāo)儀沒有辦法測(cè)，，還有普通的分光光度計(jì)可以測(cè)？如果測(cè)也是這個(gè)問題，怎么設(shè)置波長(zhǎng)？？ 現(xiàn)在的問題是已經(jīng)鋪好了在12孔板里，已經(jīng)藥物處理好了，然后怎么辦？？？？？？？？ 可以固定一下?固定怎么搞?我嘗試的固定了一下，固定完了總是要洗的，洗其實(shí)我就是加了PBS在六孔板然后就吸出來，結(jié)果細(xì)胞很少，是不是應(yīng)該離心一下？ 先染色再固定還是先固定再染色呢？？？具體怎么搞？ |
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清茶7777777
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2015-05-06 15:52:01
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