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黃薔薇銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
有關藍莓果實DNA的提取問題
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我選擇的是CTAB法提取的藍莓果實的DNA，但是提了好幾次還是沒有提取成功，不知道哪邊出錯了。 我使用的試劑是：2%CTAB緩沖液 配方是： CTAB：5g NACl20.454g 1M Tris-HCl 25mL， 0.5M EDTA 10mL， 總體積定容到25mL。 提取步驟是： 1、液氮研磨藍莓果實成粉末，取0.5g粉末到含有700μL 已經預熱30min的2%CTAB緩沖液中，緩沖液中已經加入4%β-巰基乙醇； 2、充分混勻粉末與裂解液，65℃水浴30min； 3、涼至室溫之后加入300μL的預冷過的3mol/L醋酸鈉，輕輕晃動管內物質，冰浴30min； 4、12000r/min離心5min，提取上清液轉移至干凈的試管中，加入與上清液等體積的氯仿：異戊醇（24:1），上下晃動管內物質； 5、12000r/min 離心8min提取上清液加入2μLRNase（10mg/mL），輕緩搖勻后在37℃消化10min，隨后加入等體積的氯仿：異戊醇，上下晃勻管內物質； 6、12000r/min離心8min ,提取上清液，加入2倍體積無水乙醇和1/10體積3mol/L醋酸鈉，充分混勻管內物質放在-20℃20min； 7、12000r/min離心8min，棄上清，加入1mL70%乙醇洗滌2次，12000r/min離心5min； 8、棄上清液，在干凈的工作臺上晾干沉淀，最后加入50μL滅菌去離子水溶解，輕緩混勻，放在-20℃中儲存?zhèn)溆谩?br /> 將上述提取的DNA做了凝膠電泳，用0.8%瓊脂糖凝膠電泳，120V 跑膠40min，Marker使用的是Hind DNAIII，所得的電泳圖是： 請問提過果實DNA的大神們，這是哪里出現問題了，怎么就沒有條帶出現呢？ 請大家給予幫助，在此特別感謝！ Administrator 2014-04-25 14 小時 14 分鐘.jpg |
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