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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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luo_jiaojiao

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[求助] MTT做細胞毒性測試問題已有2人參與

我做納米材料載鹽酸阿霉素DOX進細胞，但是做MTT細胞毒性測試實驗得到的數(shù)據(jù)里，加藥孵化后數(shù)據(jù)與空白對照沒有區(qū)別，孵化時間4h，12h，24h，48h都做過，結(jié)果還是一樣，問題出在哪里呢？而且做24h和48h這兩次的時候，加了MTT過4h后，細胞培養(yǎng)液變成了紫黑色，這是染菌了還是正�，F(xiàn)象呢？

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1樓 2014-04-29 15:14:27

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hsingyu

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【答案】應(yīng)助回帖

★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
luo_jiaojiao: 金幣+1, ★有幫助 2014-04-30 15:28:15

培養(yǎng)基變紫黑色，很大可能是染菌了，阿霉素裝載之后做MTT要加阿霉素裸藥作對照，或許你的濃度不夠，不知道做的是哪種細胞？

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做最好的自己~

2樓2014-04-29 19:37:07

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我聽五月天

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★ ★
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luo_jiaojiao: 金幣+2, ★★★很有幫助 2014-04-30 15:28:05

呵呵，我課題組同學(xué)跟你做的很像，也是DOX。紫黑色的話只要是不太深就正常，要是黑的不透明就是染菌了。你的各濃度DOX不起作用可能是藥物就沒有在你的載體上。你用什么手段測試的你制備后的載體+DOX的？

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為愛而生

3樓2014-04-29 21:38:22

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2樓: Originally posted by hsingyu at 2014-04-29 19:37:07
培養(yǎng)基變紫黑色，很大可能是染菌了，阿霉素裝載之后做MTT要加阿霉素裸藥作對照，或許你的濃度不夠，不知道做的是哪種細胞？

啊，真的是染菌啊……我加的是50ul的DOX和150ul的DMEM，最終藥的濃度是5ug/ml,10ug/ml,20ug/ml,50ug/ml,100ug/ml，藥的濃度達到50ug/ml后就有很多藥吸附在板子上面，加MTT前洗好多遍都洗不掉呢，A549肺癌細胞。

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4樓2014-04-30 15:24:49

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3樓: Originally posted by 我聽五月天 at 2014-04-29 21:38:22
呵呵，我課題組同學(xué)跟你做的很像，也是DOX。紫黑色的話只要是不太深就正常，要是黑的不透明就是染菌了。你的各濃度DOX不起作用可能是藥物就沒有在你的載體上。你用什么手段測試的你制備后的載體+DOX的？

可能真的是染菌了，我之前把槍頭弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢，之前加了好幾次載藥的材料都沒現(xiàn)象，我就直接做free dox了。載藥后有測紫外，然后做了confocal也有看到材料和藥進細胞了，現(xiàn)在就是愁MTT啊

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5樓2014-04-30 15:27:47

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5樓: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-04-30 15:27:47
可能真的是染菌了，我之前把槍頭弄掉在PBS里面了的……我直接加的free dox呢，之前加了好幾次載藥的材料都沒現(xiàn)象，我就直接做free dox了。載藥后有測紫外，然后做了confocal也有看到材料和藥進細胞了，現(xiàn)在就是愁M ...

你把培養(yǎng)液調(diào)成PH7.2左右再過濾，這樣得到的medium大概7.3-7.4，我上學(xué)期培養(yǎng)基碳酸氫鈉加的是1.5克，老是染菌。這學(xué)期改成3.7克怎么瞎搞都沒事兒。上次配藥忘了滅10微升槍頭，直接酒精泡了泡就配藥了，細胞沒有染菌
還有要確認一下藥物（納米顆粒）跟MTT反應(yīng)嗎？用不含血清的培基混合MTT然后給細胞加上會不會好點兒？

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為愛而生

6樓2014-05-02 09:25:02

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6樓: Originally posted by 我聽五月天 at 2014-05-02 09:25:02
你把培養(yǎng)液調(diào)成PH7.2左右再過濾，這樣得到的medium大概7.3-7.4，我上學(xué)期培養(yǎng)基碳酸氫鈉加的是1.5克，老是染菌。這學(xué)期改成3.7克怎么瞎搞都沒事兒。上次配藥忘了滅10微升槍頭，直接酒精泡了泡就配藥了，細胞沒有染 ...

我們平時是從生物公司買了DMEM直接過濾了再加血清和雙抗配成培養(yǎng)液使用，沒有去調(diào)pH，感覺太麻煩了，反正癌細胞的生命力還是比較頑強的，呵呵。藥物和MTT會不會反應(yīng)應(yīng)該怎么確認呢？種板之后加藥誘導(dǎo)前，培養(yǎng)基已經(jīng)換成僅DMEM的了，加MTT之前有先把舊培養(yǎng)基和藥棄掉，加上新鮮DMEM，然后加的MTT。但是用酶標(biāo)儀測出來的OD值跟空白對照的細胞一樣啊……何解？

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7樓2014-05-05 14:18:35

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7樓: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-05 14:18:35
我們平時是從生物公司買了DMEM直接過濾了再加血清和雙抗配成培養(yǎng)液使用，沒有去調(diào)pH，感覺太麻煩了，反正癌細胞的生命力還是比較頑強的，呵呵。藥物和MTT會不會反應(yīng)應(yīng)該怎么確認呢？種板之后加藥誘導(dǎo)前，培養(yǎng)基已經(jīng) ...

感覺還是染菌可能性大。不調(diào)PH也可，只要碳酸氫鈉按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是鋪板后染菌的，那操作還是注意下吧。

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8樓2014-05-06 09:51:21

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8樓: Originally posted by 我聽五月天 at 2014-05-06 09:51:21
感覺還是染菌可能性大。不調(diào)PH也可，只要碳酸氫鈉按照DMEM盒子上要求的加就好了。如果是鋪板后染菌的，那操作還是注意下吧。...

染菌了會使得紫外吸收值增大嗎？

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9樓2014-05-07 16:12:05

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9樓: Originally posted by luo_jiaojiao at 2014-05-07 16:12:05
染菌了會使得紫外吸收值增大嗎？...

這個真不清楚，不過MTT對細菌敏感，估計染菌就肯定很不準(zhǔn)

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10樓2014-05-07 22:40:01

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