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laqiwe鐵蟲 (正式寫手)
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[求助]
消失的蛋白 已有1人參與
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| HiS標(biāo)簽純化重組蛋白，純化后分光光度計(jì)（Thermo NanoDrop 2000）測(cè)蛋白濃度是1mg/ml,跑蛋白考馬斯染色結(jié)果什么都沒(méi)有，純化前的對(duì)照有條帶，這是什么原因呢？明明測(cè)濃度有蛋白，跑膠卻什么都沒(méi)有！��！求解 |
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yanlili 
金蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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首要你要做重復(fù)試驗(yàn)，很多結(jié)果是小錯(cuò)誤導(dǎo)致的，如果你的蛋白很多，而純化后都沒(méi)了，確實(shí)是很奇怪 其次，你有沒(méi)有把每個(gè)吸收峰做電泳？如果是在別的洗脫峰里，那就是說(shuō)你弄錯(cuò)了峰，如果哪都沒(méi)有，可能是在哪一步損失掉了。 還有可能紫外吸收是別的東西，不是蛋白質(zhì)，或者有很多雜質(zhì)的吸收。你中間有加什么步驟嗎？比如濃縮什么的，考染的靈敏度在1ug，如果什么結(jié)果都沒(méi)有，而純化前有，要不然是濃度太低，要不就是有核酸之類的。測(cè)蛋白濃度，bradford法，BCA法都能排除一些物質(zhì)的干擾。 |
2樓2014-04-30 15:13:45
3樓2014-05-02 07:09:25
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