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Hoechst33258 DNA染色數(shù)據(jù)平行性很差無法制定標準曲線，請教各位大神是哪里出問題了嗎
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 使用Hoechst33258檢測樣本溶液中的GFP含量，檢測儀器是熒光酶標儀。結果每次數(shù)據(jù)差異都很大：如果用一個樣本做幾個復孔同時檢測，標準誤大到離譜。而且每次做出的標準曲線也相差很遠。不知道有沒有哪位大神有經(jīng)驗的？使用hoechst33258直接檢測DNA的操作過程中有什么需要特別注意的嗎？我的操作是：使用的Hoechst33258為sigma公司的，雙蒸水稀釋至4ug/ml。取樣本200ul于96孔黑板，加Hoechst33258 10ul。室溫避光孵育10min用熒光酶標儀檢測。波長365/410-460.每次檢測時都會做一遍標準曲線，就是把已知的DNA配成10~1000ng/ml的階梯濃度一起檢測。 反復做了幾個星期了，次次數(shù)據(jù)都各種匪夷所思千差萬別，求點撥~~ |
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