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michaelzang木蟲 (小有名氣)
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[求助]
EDC/ sulfo-NHS 催化下脂質(zhì)體連接抗體 已有1人參與
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小蟲，最近在做脂質(zhì)體連接抗體的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)效果一直不理想，想到小木蟲牛人多，希望大家不吝指教。 制備了長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，其中PEG端有羧基，利用羧基與抗體的-NH2 連接。 查閱文獻(xiàn)說是在EDC與sulfo NHS催化下，反應(yīng)良好。現(xiàn)把步驟列在下面，希望各位指出問題所： 1、 取脂質(zhì)體懸液300 ul, 加入EDC 0.4mg 或 0.8 mg, sulfo NHS 1.1 mg 室溫?cái)嚢?15 min 后，將 1mg/ml 的 蛋白溶液 83 ul 加入上述溶液，攪拌過夜。 2、取上述反應(yīng)液20 ul 加入 SDS PAGE 5*loading buffer 5 ul 煮沸 5 min ,上樣，電泳后，考馬斯亮藍(lán)染色，脫色后觀察條帶位置。 這是問題就出來了，單純的抗體與 理論上連接的抗體條帶位置是一樣的，我就不知道是連上了沒測(cè)出來，還是根本就沒連上。此外還有圖片一張，可能是連上的 3. 但是這個(gè)條件下，圖重復(fù)不出來 2014-5-3.jpg |
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5樓2018-08-17 09:05:59
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