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~春夢(mèng)秋云~金蟲 (小有名氣)
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[求助]
誰(shuí)用過(guò)pEarleyGate 103做擬南芥的瞬時(shí)表達(dá)，這個(gè)載體好用嗎？ 已有1人參與
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| 本人準(zhǔn)備用這個(gè)載體做亞細(xì)胞定位，預(yù)測(cè)的位置在葉綠體上，請(qǐng)問(wèn)有沒(méi)有人用過(guò)這個(gè)載體，提供一點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)?zāi)�，在此不勝感激！還有做這個(gè)怎么做陽(yáng)性對(duì)照呢？ |
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starseacow
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5樓2014-05-08 19:02:00
starseacow
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-07 00:27:36
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-07 00:27:36
| 這個(gè)載體是35S啟動(dòng)子加gateway系統(tǒng)，連接GFP和HIS標(biāo)簽，可以用western檢測(cè)蛋白表達(dá)。做瞬時(shí)表達(dá)亞細(xì)胞定位沒(méi)有問(wèn)題。但由于是35S強(qiáng)啟動(dòng)子，可能你需要注意目的蛋白過(guò)表達(dá)是否對(duì)正常定位尤其是葉綠體定位有影響，我沒(méi)有做過(guò)葉綠體相關(guān)蛋白，所以無(wú)法確定。至于陽(yáng)性對(duì)照，葉綠體本身有自發(fā)熒光，>650 nm可以觀察到，拿這個(gè)可以做一個(gè)定位對(duì)照。 |
2樓2014-05-06 23:03:53
~春夢(mèng)秋云~
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3樓2014-05-08 13:45:05
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6樓2014-05-12 10:57:50
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