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bpx1990新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于冰凍切片的一些問題，求教 已有1人參與
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非生物專業(yè)新手第一次做冰片，做完之后一肚子疑問，自己查資料查得有點(diǎn)亂，于是來問問大神們。。。 做的是豬肝臟的冰凍切片。 1、原材料（各種動(dòng)物組織）如果不能當(dāng)場(chǎng)做冰片的話，應(yīng)該怎么保存?我是用液氮凍了之后扔在-50度冷柜（實(shí)驗(yàn)室只有這一臺(tái)冷柜）里，放了差不多一周才去切的片，請(qǐng)問是否合適； 2、看資料說做完冰片之后應(yīng)當(dāng)表面覆蓋一層中性樹脂來保存，否則會(huì)龜裂。請(qǐng)問具體的操作方法？比如用刷子刷一層？還有。。中性樹脂這東西有具體的名稱或者型號(hào)嗎。。。 3、如果不覆蓋這層樹脂，冰片能保存多久不龜裂？我做冰片的地方離顯微觀察的地方還挺遠(yuǎn)的。。。就粘在載玻片上沒涂樹脂，然后走半天拿回來看，是不是已經(jīng)不準(zhǔn)了。。。 4、冰片如果長(zhǎng)時(shí)間保存的話應(yīng)該放哪兒？指導(dǎo)我做冰片的哥們說放4度冰箱里冷藏就行，可是看文獻(xiàn)大家似乎都是放-20凍著。。 5、肝組織冰片該用啥染色劑？看文獻(xiàn)似乎都是用HE染色劑？（不過我沒染色就去觀察了一下，貌似還挺清楚的，這樣放進(jìn)論文里是不是會(huì)被無情嘲諷  。。）另外肌肉組織和骨組織分別該用啥染色？順便求配方。。想到的就是以上這些，說得有點(diǎn)亂，懇請(qǐng)各位大牛神人不吝賜教，先謝過了。。。  |
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junnavme2014
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5樓2014-05-07 22:52:35
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2樓2014-05-07 19:39:41
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 冰凍切片的包埋塊最好用干冰或液氮速凍，速凍以后長(zhǎng)期不用建議放在-80度冰箱，切片時(shí)將包埋塊取出后應(yīng)放在切片機(jī)腔內(nèi)15分鐘左右使包埋塊升溫到腔體溫度，不要急著去切，切好的片子應(yīng)該快速放置于干冰上或暫時(shí)存放在切片機(jī)中，長(zhǎng)期保存建議放在-80度冰箱并且轉(zhuǎn)運(yùn)過程應(yīng)該時(shí)刻保持低溫以使樣品保持水分不干燥，使用時(shí)應(yīng)將片子固定然后脫水處理，做HE染色可以具有很好的層次，在顯微鏡底下觀察立體感很好而且層次清晰，制作永久保存片的話建議用中性樹脂包埋就可以了，國(guó)藥就有中性樹脂賣，或者上海生工也有賣的，敷上樹脂以后再用蓋玻片蓋片觀察。 |
3樓2014-05-07 20:15:21
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4樓2014-05-07 21:06:42
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