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[求助]
核酸檢測方面 有哪些牛人，想考博 不知道報考誰的 已有2人參與
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| 做的核酸檢測方面的，但是對哪些人做的很好不是很了解，只知道譚蔚泓等人，還有其他的哪些牛人嗎，求助 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
三國戀(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+7, 鼓勵熱心回帖交流 2014-05-18 19:51:22
感謝參與，應助指數 +1
三國戀(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+7, 鼓勵熱心回帖交流 2014-05-18 19:51:22
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我自己寫了一個核酸檢測方面的review，希望對你有用，（100%原創(chuàng)，轉載請注明，謝謝�。� 作為現代生物技術的基礎的PCR技術，出現在1983年。PCR過程中的解鏈、退火、以及延伸的循環(huán)操作以及成為核酸擴增步驟的標準過程，同時PCR也成為了核酸擴增的同義詞。然而，這一技術是利用耐熱性核酸聚合酶在人為設定溫度循環(huán)下實現的，在自然界生物體內核酸并不是這樣延伸或者擴增的。人們所熟悉的生物大都是在條件非常溫和的條件下（而且是在恒溫下）實現其核酸延伸或擴增的�？戮锏暮诵募夹g就是實現在體外的試管中（in vitro），實現在生物體內（in vivo）的高效的核酸擴增過程。 在PCR技術問世后的30多年中，衍生出許多靈敏度更高，或者操作更簡便，或者定量的方法。這些方法以及廣泛應用于科研，醫(yī)院，疾控，以及農林牧漁等等。然而在大規(guī)模簡化操作過程，或者提供定量化的研發(fā)及其商業(yè)化過程中，使用者對儀器，試劑，耗材，甚至技術支持的依賴卻與日俱增，反而限制了該技術在更廣泛領域的應用。 在核酸擴增技術發(fā)展過程中，很多人努力改進在溫度來簡化核酸擴增步驟。經典的PCR是三溫度循環(huán)（解鏈，退火，和延伸），在其它改進型的PCR技術都是兩溫度循環(huán)（退火和延伸合并為一步）。在恒溫擴增（isothermal amplification）方面，出現了如等溫核酸擴增，RNA擴增等技術，以Bst核酸聚合酶延伸的恒溫擴增的技術路線大多是利用兩對或者更多的引物，在60度左右實現單一溫度的擴增。該技術在起始的引物退火時，需要一個90度以上的步驟來實現引物和模板的配對。以RNA逆轉錄酶來檢測核酸的技術，最佳反應溫度在42度左右，該技術用以檢測RNA，不需要解開雙鏈來配對，不存在解鏈的問題，也避免了產物檢測后續(xù)的污染問題。 在溫度循環(huán)方面的努力，也有很多人放在高通量上面，也就是多重PCR，這方面技術也衍生出不同的各種技術。 在擴增方面，有人不停的優(yōu)化反應體系，篩選效率更高的聚合酶，這些都極大的提高了核酸擴增的效率，從而提高了檢測靈敏度。 除了核酸擴增之外，一部分致力于擴增前的核酸提取，比如spin-column提取，自動提取等等，模板質量的提高能提高擴增的效率，從而提高檢測靈敏度。 也很多人致力于核酸擴增后的檢測，最初都是通過瓊脂糖或者聚丙烯酰胺電泳檢測，到毛細管電泳檢測，然后發(fā)展到熒光檢測，再發(fā)展試紙條檢測。電泳檢測的問題是污染嚴重操作麻煩。熒光檢測的好處是擴增和檢測同時進行，而且可以進行定量。試紙條檢測方便快捷。 當然每個步驟的優(yōu)化結果都可以組合起來，形成新的技術或產品。 好了，今天就寫到這里吧，有機會我在展開 |
2樓2014-05-16 21:18:27
更深的藍
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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3樓2014-05-18 17:54:29
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