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亞瑟王1987新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用多肽包板子檢測(cè)病毒出現(xiàn)假陽(yáng)性 已有2人參與
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我用一種能夠吸附病毒的小分子多肽包板子，包備液用的是普通的碳酸氫鹽包被液，多肽濃度為100μg/ml.然后用含0.5％的BSA，0.05％的Tween-20PBS作封閉液（也試過(guò)脫脂牛奶，胎牛血清，提高BSA濃度），封閉1個(gè)小時(shí)（也試過(guò)過(guò)夜封閉）， 用洗滌液洗三次，然后加入病毒（大概10^8PFU/ml）100μl孵育1h,洗滌三次，加入抗病毒的陽(yáng)性血清孵育1h，洗滌三次，最后加入HRP標(biāo)記的二抗孵育1h，洗滌5次，然后用顯色液顯色。 問(wèn)題是當(dāng)我用什么都不含的包被液包板子作陰性對(duì)照，其它都不變時(shí)，會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性，OD值為1.0左右挺高的，所以我想是不是封閉的不充分，所以病毒總會(huì)吸附到板子上。也用不含病毒的細(xì)胞懸液作對(duì)照，結(jié)果OD值是陰性不超過(guò)0.3.所以好像只要加病毒就會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性，不管我包被了什么東西沒(méi)有�？纯创蠹矣袥](méi)有什么辦法可以解決這個(gè)問(wèn)題。謝謝！ |
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2樓2014-05-18 21:45:08
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7樓2014-05-22 19:02:33
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