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極道始之魔銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
northern bloting
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最近做northern實(shí)驗(yàn)，我用的是點(diǎn)雜交的方法。RNA樣品是是已經(jīng)降解了的，要做它的種屬鑒定。設(shè)計(jì)了6個(gè)生物素標(biāo)記的探針，一直坐不出結(jié)果。尼龍膜上沒(méi)有明顯的斑點(diǎn)，有時(shí)只有很小的一顆，所以不能確定。后來(lái)做了幾次陽(yáng)性對(duì)照，直接把探針點(diǎn)在膜上，發(fā)現(xiàn)有很明顯的雜交斑點(diǎn)，所以操作不存在問(wèn)題。目前的問(wèn)題就是RNA樣品和探針雜交不上。除了換探針外，目前還存在哪些問(wèn)題？ 有以下疑惑 1.交雜溫度，這個(gè)說(shuō)是要慢慢摸索的，說(shuō)是比TM值低20攝氏度左右，這個(gè)沒(méi)問(wèn)題 2。RNA樣品需要怎么處理啊，有試過(guò)95攝氏度5min，再放冰上，也試過(guò)加甲醛等變性劑 3.試過(guò)跑電泳，轉(zhuǎn)膜沒(méi)成功，這個(gè)可能樣品量太少了 ，求助各位道友 |
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