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kku6666金蟲 (初入文壇)
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[求助]
共聚焦觀察fitc-細(xì)菌，及樣本處理等相關(guān)問題
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我是用fitc-標(biāo)記藥物后，與金葡作用不同時(shí)間后（1h、2h、3h、4h、6h、8h、10h），滴到玻片制片后，上共聚焦觀察藥物在菌內(nèi)的定位情況。 現(xiàn)在有幾個(gè)問題，一是用pbs洗藥物與菌懸液作用后的溶液，離心時(shí)轉(zhuǎn)速和時(shí)間大約是多少？（這時(shí)已經(jīng)作用了相應(yīng)的時(shí)間）；第二是，制片時(shí)我用多聚甲醛固定細(xì)菌，用量是多少？我想洗好的菌懸液10ul滴到玻片上后，再加多聚甲醛固定；第三，如果不用防熒光淬滅劑的話，固定好的片子可以放多長(zhǎng)時(shí)間，多聚甲醛固定后不清洗對(duì)熒光有影響嗎？因?yàn)楣潭ê鬀]有清洗玻片。而且第二天再上共聚焦，標(biāo)本要過夜，會(huì)不會(huì)影響熒光強(qiáng)度。有哪位大神做過相關(guān)實(shí)驗(yàn)或?qū)@方面懂得比較多的指點(diǎn)一下，萬(wàn)分感謝 |
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