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藍(lán)色泡沫321銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
有關(guān)限制性內(nèi)切酶的用法 已有2人參與
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| 我構(gòu)建了T載體和目的基因的重組質(zhì)粒，現(xiàn)在要進(jìn)行雙酶切獲取目的基因，可是上下游用的酶速度不用，說明書上說一個只需要37度5min，另一個要37度16小時，而且兩種酶的buffer也不一樣，我要怎么建立酶切體系啊，兩個酶和buffer是要一起加進(jìn)去還是一個反應(yīng)完在把另一個加進(jìn)去 |
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藍(lán)色泡沫321
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3樓2014-06-10 16:50:10
gaojuan1985
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2樓2014-06-10 16:36:31
youlinglyw
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
藍(lán)色泡沫321(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-10 20:47:45
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藍(lán)色泡沫321(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-10 20:47:45
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反應(yīng)時間倒是不會影響太多 buffer的話，這個第一次聽說不共用，一般用Takara的酶，有張表，總是可以配上的。如果實在配不上，你用green buffer，這個是個萬能buffer 其實，你不妨試一下用其中一個buffer，畢竟酶切沒那么多嚴(yán)格限制，選擇buffer時，選用兩種酶相對來說活性都很高的那一種就可以了，只不過是效率問題，效率低的話，多切會兒 另外，分步切也可以，不過效率沒想象的高 另外，額外說一下，NEB的在線分析軟件Double Digest Finder 不錯。你想進(jìn)行任意兩種酶的雙酶切都可以通過這個軟件查詢能不能做，做得時候用什么Buffer。 |
4樓2014-06-10 17:45:09
藍(lán)色泡沫321
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5樓2014-06-10 19:34:56
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