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生院深似海金蟲 (初入文壇)
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[求助]
有沒(méi)有蟲友做過(guò)探針類的熒光定量pcr？或者了解細(xì)菌的16srDNA的 進(jìn)來(lái)探討下啊~謝謝 已有1人參與
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我想問(wèn)問(wèn)大家金黃色葡萄球菌和大腸的16srDNA是單拷貝的嗎?用來(lái)做探針特異性高不？ 有做過(guò)探針類實(shí)時(shí)定量pcr的嗎？怎么選擇基因片段，使得設(shè)計(jì)探針特異性更高呢？探針應(yīng)該是送公司幫著制備吧？那送公司之前，有沒(méi)有什么檢驗(yàn)方法，知道自己選擇的序列特異性很高呢（普通pcr檢驗(yàn)？或者syb green I檢驗(yàn)？）？沒(méi)做過(guò)這個(gè)領(lǐng)域，求大神指點(diǎn)~��！謝謝��！ |
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3樓2014-06-22 16:06:02
王丹2013
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
生院深似海: 金幣+5, ★有幫助 2014-06-19 10:20:10
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
生院深似海: 金幣+5, ★有幫助 2014-06-19 10:20:10
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細(xì)菌16S rDNA相當(dāng)保守，所以經(jīng)常被用作熒光定量的內(nèi)參基因。 熒光定量的探針與其他引物設(shè)計(jì)差不多，只是對(duì)引物要求高一些，不能任何有錯(cuò)配，引物二聚體以及發(fā)夾結(jié)構(gòu)，退火溫度最好在55℃，長(zhǎng)度不要太長(zhǎng)，150-250 bp比較好，盡量不要超過(guò)400 bp. 做熒光定量之前要先用普通PCR檢驗(yàn)一下特異性。 |
2樓2014-06-18 21:46:34
王丹2013
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4樓2014-06-22 21:51:47
5樓2014-06-23 10:45:37
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