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永峰1230銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
質(zhì)粒雙酶切 沒有了條帶 已有7人參與
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-----------------雙酶切 過(guò)夜，之后跑電泳， 3-5 泳道， 是雙酶切 ，沒有了 質(zhì)粒， 沒有明顯的條帶，，，只有 不太明顯的 彌散的 拖帶，，請(qǐng)問(wèn)這是 什么原因呢。。。。。謝謝 謝謝謝謝  |
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pansums
新蟲 (初入文壇)
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- 蟲號(hào): 2226920
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- 專業(yè): 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
【答案】應(yīng)助回帖
| 很多人都碰到過(guò)酶切之后出現(xiàn)smear條帶，或者酶切之后跑膠就完全不見了條帶，曾經(jīng)就這個(gè)問(wèn)題咨詢過(guò)試劑供應(yīng)商的技術(shù)顧問(wèn)，但無(wú)解�，F(xiàn)在自己弄明白了，大部分情況下，是因?yàn)樘崛〉馁|(zhì)粒中混有核酸酶，在酶切的條件下（37℃，適宜buffer，等），核酸酶就能發(fā)揮作用，于是就出現(xiàn)了跑膠所見的結(jié)果。幾乎所有公司出售的質(zhì)粒提取試劑盒都宣稱可以專一性的結(jié)合DNA質(zhì)粒，事實(shí)上是不可能的，沒有任何一家公司可以做得到。除了結(jié)合質(zhì)粒之外，還會(huì)結(jié)合較多的核酸酶、內(nèi)毒素等雜質(zhì)，之后的洗滌很關(guān)鍵，但幾乎絕大部分公司（包括那些自詡為高端試劑供應(yīng)商的公司）在有效去除核酸酶、內(nèi)毒素方面顯得無(wú)能為力，但卻還會(huì)宣傳自己可以去除核酸酶甚至宣傳是無(wú)內(nèi)毒素（全球目前沒有任何一家公司可以做到“無(wú)”內(nèi)毒素，當(dāng)然可以做到不同程度地降低內(nèi)毒素濃度）。 |
23樓2015-09-06 18:18:21
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[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
2樓2014-06-19 16:44:09
3樓2014-06-20 07:25:41
永峰1230
銅蟲 (小有名氣)
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4樓2014-06-20 14:32:59
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