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xp634768210新蟲 (初入文壇)
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[求助]
放線菌的慶大霉素，利福平抗性篩選 已有2人參與
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各位大神： 本人最近剛接觸微生物知識，導(dǎo)師安排一個關(guān)于放線菌抗生素篩選的實驗，我現(xiàn)在有一株鏈霉屬的放線菌，有PDA培養(yǎng)平板若干和IPS2液體培養(yǎng)的孢子，現(xiàn)在遇到的問題有，1.孢子懸浮液怎么制備？2.懸浮液濃度怎么調(diào)整？（文獻上讓調(diào)整到1/100000),3.怎么判斷MIC，是根據(jù)菌落的數(shù)量嗎？求各位幫助，多謝！�。� |
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2樓2014-06-24 12:52:40
xp634768210
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3樓2014-06-24 16:57:41
xp634768210
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4樓2014-06-25 15:32:38
璐太彎
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5樓2015-06-26 09:47:56
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
laozuzunzhe: 金幣+4, 鼓勵熱心應(yīng)助！ 2015-06-26 17:28:19
laozuzunzhe: 金幣+4, 鼓勵熱心應(yīng)助！ 2015-06-26 17:28:19
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個人感覺1和2其實是一個問題，如樓上所說，你洗下斜面孢子，得到的實際不是孢子懸液，因為很容易刮到菌絲，需要過濾一下，然后稀釋涂布就行了，多做幾組平行樣，根據(jù)最后的結(jié)果判定你的孢子懸液濃度，后面你就可以用上面同樣的稀釋倍數(shù)，稀釋到你想要的孢子濃度了（如1/100000）。 最后是MIC的問題，找到一個例子，希望對你有幫助： 致病真菌MIC值測定： 各菌培養(yǎng)24h后，分別用血細胞計數(shù)板鏡下計數(shù)，并以RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)整濃度至1000～5000個/ml。取無菌96孔板，于每排1號孔加RPMI1640 100微升作空白對照; 3～12號孔各加新鮮配制的菌液100微升；2號孔分別加菌液192微升和氟康唑注射液8微升。2～11號孔10級倍比稀釋，使各孔的最終氟康唑濃度分別為80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.32和0.16微g/ml；12號孔不含藥物，作陽性對照。各藥敏板于30℃培養(yǎng)24h后，用酶標分析儀于620nm測各孔OD值。與陽性對照孔比，以O(shè)D值下降80％以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC80（真菌生長80％被抑制時的藥物濃度）。當藥物的MIC80值超過測定濃度范圍時，按以下方法進行統(tǒng)計：MIC80值高于最高濃度80微g/ml時，計為“＞80微g/ml”；MIC80值為最低濃度或在最低濃度以下時，不作區(qū)別，均計為“≤0.16微g/ml”。 若是要考察其它藥物的MIC，把氟康唑換作其它藥物即可 |
6樓2015-06-26 13:47:47
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