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EATY銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關于湖泊沉積物DNA提取的問題！ 已有2人參與
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| 用Fast DNA spin kit for soil試劑盒提取的湖泊沉積物DNA ，OD260/OD280 1.7左右 OD260/OD230 0.2左右 （很低了） 不知道這些DNA能不能用于后續(xù)的實驗（DGGE、、克隆測序、定量PCR等）？ |
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關于DNA純度鑒定，純的DNA溶液其OD260/OD280應為1.8，OD260/OD230應大于2.0。OD260/OD280≈1.8(＞1.9，表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白質、酚等污染） OD230、260、280、320下的吸光度分別代表了鹽濃度、核酸、蛋白等有機物、背景（溶液渾濁度）的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio)。不知道你的OD260/OD280比值是多少？ 制備基因組DNA通常要求得到的片段的長度不小于100-200kb。在DNA提取過程中應盡量避免使DNA斷裂和降解的各種因素，以保證DNA的完整性，為后續(xù)的實驗打下基礎。 除了測濃度外，還可以跑個電泳來鑒定一下：取1μg基因組DNA，在0.8%瓊脂糖凝膠上電泳，檢測DNA的完整性，或多個樣品的濃度是否相同。電泳結束后在點樣孔附近應有單一的高分子量條帶。 我提的DNAOD260/OD280在2.1~2.3之間 那有可能存在RNA的污染，加RNA酶處理一下吧！如果DNA濃度產量較高的話，可以重復抽提步驟一遍。 先跑個電泳看看如何吧？ |
2樓2014-06-26 21:57:06
EATY
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3樓2014-06-27 09:04:43
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4樓2014-06-27 11:34:28
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5樓2014-06-28 17:45:40
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