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zcz772170623銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
提取細(xì)菌基因組DNA時(shí)出現(xiàn)問題，求幫助 已有1人參與
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這是我的提取方法 1、收集培養(yǎng)好的細(xì)菌菌體2mL。12000rpm，1min，棄上清液。 2、加入200uL溶液I，渦旋振蕩混勻。 3、加入200uL 2X的細(xì)菌裂解液，顛倒混勻，室溫反應(yīng)30min，中間反復(fù)顛倒混勻數(shù)次。 4、加入200uL 5M的氯化鈉混勻，顛倒混勻，12000rpm，15~20min，取上清。 5、加入1/5體積的CTAB/NaCl，顛倒混勻，混勻65℃（金屬�。�，30min。 6、12000rpm，15~20min，取上清。 7、向上清液中加入0.5mL濃度為10mg/mL的RnaseA，37℃，30min。（可不做） 8、加入等體積的酚/氯仿（1:1）（異戊醇是為了消沫，可不用），12000rpm，15min。取上清液重復(fù)至無中間層。 9、加入等體積的氯仿，12000rpm，15min。 10、取上清液加入0.6倍體積冰預(yù)冷的異丙醇沉淀過夜（-20℃），4℃，12000rpm，15min。 11、冰預(yù)冷的70%乙醇洗兩次，無水乙醇洗一次。 12、干燥后用適量TE溶解。 溶液I：等同于提取質(zhì)粒所用的溶液I 50mM 葡萄糖、25mM Tris-Cl（pH8.0）、10mM EDTA（pH8.0）、高壓滅菌 1X裂解液： 40mM Tris-醋酸，20mM 醋酸鈉（pH7.8），1mMEDTA，1%SDS 配制100mL裂解液：1M Tris-醋酸4mL，0.5M EDTA 200uL，3M 醋酸鈉（pH7.8） 667uL，SDS 1g 配制2X的將各試劑加大一倍。 CTAB/NaCl： 5% CTAB；1.4M NaCl；50mM Tris-cL 在到了第2步的時(shí)候，出現(xiàn)的白色沉淀怎么都離心不下來，飄在上清液里，吸了些上清液之后，在第3步離心的時(shí)候就根本沒有上清液了，是白色的果凍一樣，不知道是怎么回事。 |
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2樓2014-07-09 11:51:14
zcz772170623
銅蟲 (小有名氣)
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laojiu9878
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