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wangdandelia木蟲 (正式寫手)
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[求助]
硝酸銀染色
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大家好！請問有做PAGE膠電泳后的硝酸銀染色的同學(xué)嗎？我最近開始做脂多糖的鑒定，都沒有褐色條帶，參照物的標(biāo)準(zhǔn)脂多糖只是呈現(xiàn)阿辛蘭的顏色，而我的樣品什么顏色都沒有。。。 我的步驟是： 1 將膠浸入200 ml 含有 0.005%阿辛蘭染料，溶劑含有50%去離子水, 45% EtOH, 5% CH3COOH，振動30rpm，過夜； 2 用含有30%乙醇的 100 mL水溶液洗滌10min,然后100mL水洗5min; 3 200 mL 高碘酸鈉浸泡5min; 4 100mL去超純水水浸泡，洗滌兩次，各自5min; 5 硝酸銀染料浸泡30min（振蕩40rpm），我是用黑色袋子包裹，放在搖床上面搖動。配方是AgNO3 2 g/L (280 mg in 140 water), 1.5 mL NaOH 5M, 然后加入氨水直到沉淀消失；這步我是加了300mL; 6 連續(xù)用水洗滌兩次； 7 含有甲醛的檸檬酸鈉溶液做為顯色液，100 mL超純水, 50 μL 甲醛（37%濃度，放在冰箱里，距離上一次使用的時間超過兩年了 ）, 50 μL citrate de sodium 10%。（這個步驟我配了400mL，在顯色的過程中不斷換新的溶液確保膠的背景干凈。 8 直到有條帶出現(xiàn)加入固定液：50% eau ultrapure, 45% EtOH, 5% CH3COOH 請問我的步驟有問題嗎？大家有什么好的建議嗎？實(shí)驗(yàn)卡在這里好著急��！多謝了！��！ |
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