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人生初見(jiàn)木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助qPCR相關(guān)問(wèn)題！新手，真的好糾結(jié)啊 已有3人參與
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投了文章，讓補(bǔ)定量的實(shí)驗(yàn)，時(shí)間比較緊。但自己是新手，做了之后結(jié)果不好，不知道問(wèn)題出在哪里，還請(qǐng)高手指點(diǎn)�。。�！ 做標(biāo)曲時(shí)，目的基因的E=108%, 內(nèi)參E=98%。 而且目的基因的，除了一個(gè)最低濃度的一個(gè)孔溶解曲線前面有個(gè)小峰外，其余都正常。見(jiàn)圖一。 但是做我的樣品時(shí)候，所有的孔，包括內(nèi)參引物的在溶解曲線前面都出現(xiàn)了小峰，有的峰值還很高。見(jiàn)圖二。 我想問(wèn)：1、內(nèi)參和目的基因的擴(kuò)增效率差10%，是不是不能用2−ΔΔCt進(jìn)行計(jì)算呢？?jī)?yōu)化體系條件能使二者的擴(kuò)增效率接近嗎？ 2、溶解曲線前面出現(xiàn)小峰，是不是因?yàn)槟０逵袉?wèn)題呢？是不是基因組DNA的污染？ 真的很著急，不知道該如何解決。 請(qǐng)大家?guī)蛶兔�，不甚感激！�?br /> 截圖1.png 截圖2.png |
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3樓2014-07-14 11:37:36
jurkat.1640
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4樓2014-07-14 14:05:10
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