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[求助]
請教T cell hybridoma 的培養(yǎng)問題
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各位老師同學(xué)， 本人剛剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)，從合作者那里收到隔夜運送的T cell hybridoma,放在干冰中。細(xì)胞系是58alpha－beta－CD8alpha＋beta＋ cell line，用的medium是complete RPMI 1640 medium plus 0.1 mg/ml G418 and 2 mg/ml hygromycin.收到細(xì)胞后我直接在37度下解凍然后1ml細(xì)胞溶液先加入9ml的medium洗滌一次，吸去上清液后加入5ml medium然后放入37C，5%CO2 的incubator中，放入incubator之前我會用hemocytometer數(shù)一下細(xì)胞density，我發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形狀成非常完美的球形，而且不能被trypan blue染色，但是培養(yǎng)兩天之后觀察細(xì)胞就全部能被trypan blue染色了，這說明細(xì)胞死了。但是在培養(yǎng)滿一個星期之后細(xì)胞又都活過來了，數(shù)量很多且medium也變成黃色了，而且細(xì)胞不能被trypan blue 染色，但是奇怪的是細(xì)胞的形狀不像最初的時候那么圓了，而且接下來做calcium flux發(fā)現(xiàn)激活用anti－CD3和anti－IgG激活不了calcium，用別的抗體檢查表面TCR，CD8，CD3分子都在，請問是不是由于運輸?shù)臅r候細(xì)胞已經(jīng)不太正常所以我做不出來calcium flux的現(xiàn)象呢？ 謝謝大家！ |
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