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lantianjesus新蟲 (小有名氣)
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[交流]
請教大家?guī)讉�層析吸附過程中緩沖液配置的問題？ 已有1人參與
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剛開始接觸層析純化，許多基礎(chǔ)問題都不太懂，見諒啊，想請教下大家： 1. 吸附蛋白質(zhì)時，PB緩沖液濃度一般采用0.1M還是0.01M呢，許多文獻(xiàn)相同蛋白質(zhì)吸附但選擇PB濃度卻不一樣，為什么？ 2. 1.5M的Nacl洗脫液是指Nacl在PB溶液里的濃度嗎？是指Nacl+PB緩沖液？還是指Nacl水溶液+PB緩沖液？加入以Nacl為溶質(zhì)，以PB作為溶劑吧？配方？ 3. 做BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線時，有一種是按照不同濃度配BSA溶液，另一種先配置1mg/ml蛋白質(zhì)溶液，然后通過稀釋成不同濃度，我發(fā)現(xiàn)兩種方法做出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線都呈指數(shù)形式，線性擬合只能在97%，如何解決？ 4. 研究不同ph值條件，就需要選擇不同范圍的緩沖液，那如果不同緩沖液濃度不一致會不會對結(jié)果有影響呢？緩沖液濃度的大小有什么作用或者意義呢？ |
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lantianjesus
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4樓2014-07-17 10:20:14
lantianjesus
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2樓2014-07-16 15:03:27
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1.PB緩沖液看你的需求，一般0.1M的電導(dǎo)基線比較高，做離子交換什么的就不要用了。0.01~0.05M的還是比較常用。但是在做一些特殊試驗，比如親和，分子篩時，0.1M的又成常用的了。 2.1.5M指的是在你的洗脫液中含有1.5mol/ml的NaCl，至于溶劑是什么，你用的是PB洗脫就是PB，用水就是水，用檸檬酸就是檸檬酸，還是那句話，看你的層析類型和需求。 3.你可以采用濃配后稀釋的方法來進(jìn)行配制，比較準(zhǔn)確，多配幾回吧，這個是熟練才會好的。記得BSA要保護(hù)好，別污染了。線性在97%其實也可以用了。 4.緩沖液濃度大小對于蛋白來說主要是增強(qiáng)其離子效應(yīng)和水化效應(yīng)。并且起到等滲保護(hù)的作用，對于層析來說，不同的PH有不同的配方，需要你自己查閱。不同濃度的緩沖液，對于層析的影響是不一樣的。在做層析時要特別注意。 |
3樓2014-07-16 17:19:46
lantianjesus
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