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syp719木蟲 (正式寫手)
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[求助]
SSR-PCR 雜帶很多 求解決方案 已有2人參與
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此圖為SSR-PCR產(chǎn)物非變性PAGE電泳圖譜，marker為20bp,第四條帶為200bp,二倍體植物為什么這么多帶，退火溫度左邊1-8為63.4度，右邊8個(gè)為61.9度，上下游引物Tm值分別為59.8℃，59.6℃，是模板純度不夠還是PCR程序不適合還是反應(yīng)體系不合適呢？求各位老師同學(xué)提供寶貴意見建議！謝謝！�。�！ 【備注：10ul反應(yīng)體系PCRmix5-6ul,premierF/R各0.5ul,模板1ul(約40ng），ddH20補(bǔ)齊。 反應(yīng)程序：94℃ 4min,94℃ 50S,63.4℃ 50S,72℃ 30S,30cycle,72℃ 7min, 電泳上樣2ul,電泳40min,硝酸銀染色，氫氧化鈉甲醛溶液顯色】 DSC04720.JPG |
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9樓2017-06-10 14:06:00
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說實(shí)話哈，我覺得如果是sSR引物的話條帶燉才更好啊，越有利于分析多態(tài)性啊，這又不是為了擴(kuò)增回收，只要sSR引物擴(kuò)增條帶是穩(wěn)定存在的，當(dāng)然是多多益善了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2017-06-11 10:55:03
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