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肝微粒體p450含量測(cè)定的遇到一些問(wèn)題
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肝微粒體自己制備的，BCA法測(cè)蛋白含量16mg/ml，但是測(cè)定p450含量時(shí)發(fā)現(xiàn)450和490處基本沒(méi)有吸收，420處吸收很大。分析是p450轉(zhuǎn)化成p420了。可能是我制備的肝微粒體存在問(wèn)題或者我測(cè)p450含量時(shí)操作出現(xiàn)問(wèn)題。 想問(wèn):1.如果是制備的微粒體沒(méi)有活性，那BCA法能測(cè)到p420嗎？如果是微粒體制問(wèn)題，有可能是什么操作不當(dāng)引起的呢？我是全程冰上操作的？ 2. 用于測(cè)p450含量的微粒體是-80攝氏度冰箱里拿出來(lái)解凍再測(cè)的，請(qǐng)問(wèn)這有影響嗎？解凍是放在冰上解凍還是要37℃迅速解凍？ 3.p420是怎么產(chǎn)生的？ 4.測(cè)定p450含量需要全程冰上操作嗎？包括通co那步？ 5.一般多少濃度的微粒體來(lái)測(cè)？該加多少連二亞硫酸鈉？有具體量的關(guān)系嗎？ 6.因?yàn)闆](méi)有那個(gè)可以掃基線的那個(gè)儀器，所以就用的一個(gè)只可以放一個(gè)比色皿的分光光度計(jì)，我是先把加了連二亞硫酸鈉的那個(gè)比色皿進(jìn)去，測(cè)定450，490，420（為了看有沒(méi)有轉(zhuǎn)化成p420），扣空白，然后把通co的比色皿放進(jìn)去，也是三個(gè)波長(zhǎng)。這樣是否正確？我不明白為什么在沒(méi)加連二亞硫酸鈉之前的兩個(gè)比色皿也要先掃基線校正？我是否需要在前面補(bǔ)上這一步？ 暫時(shí)就這些，麻煩知道的師兄師姐解答了，我簽到了三天終于可以問(wèn)問(wèn)題，簡(jiǎn)直要感動(dòng)的哭暈在廁所了＠(￣-￣)＠ [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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2樓2014-07-22 09:10:40
3樓2014-07-22 12:43:23
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