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一旺百旺

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首先看看細(xì)胞密度，包括沒(méi)有貼壁的，大概知道你凍存的時(shí)候是不是細(xì)胞密度太低。如果太低狀態(tài)不好也正常，細(xì)胞生長(zhǎng)有一定的密度，要不生長(zhǎng)很慢。到最后細(xì)胞狀態(tài)可能也不會(huì)太好。復(fù)蘇大約五個(gè)小時(shí)以后就要看看細(xì)胞狀態(tài)，該加血清加血清，該換液就換液。很大程度上你凍的時(shí)候沒(méi)有凍好，比如消化的時(shí)間不對(duì)，還有復(fù)蘇的時(shí)候離心轉(zhuǎn)速，還有復(fù)蘇的時(shí)候可以用培養(yǎng)液離心兩次來(lái)清洗。

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11樓2014-07-25 10:08:59

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張李云

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2樓: Originally posted by 那個(gè) at 2014-07-23 12:44:09
慢慢等一下吧
只要沒(méi)染菌，慢慢養(yǎng)著吧，就別老折騰它們了。

同意，前一陣子，我養(yǎng)的Raw 264.7的時(shí)候也遇到同樣的問(wèn)題，稀疏，生長(zhǎng)緩慢，都想放棄了，于是有四五天沒(méi)管他們，結(jié)果反而長(zhǎng)滿了。柳暗花明的感覺(jué)。

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科研之路不平坦……

12樓2014-07-25 10:51:44

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9樓: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-25 09:48:24
細(xì)胞凍存效果不好，大部分細(xì)胞不能復(fù)蘇。少量細(xì)胞存活需要時(shí)間慢慢長(zhǎng)起來(lái)，耐心等待吧。應(yīng)該沒(méi)有什么問(wèn)題。

至于凍存細(xì)胞，我這里非常簡(jiǎn)單：用含10% DMSO全血清凍存，也不需要逐步降溫的復(fù)雜過(guò)程，就是把細(xì)胞放在 ...

謝謝你，又給了我點(diǎn)兒信心~
我現(xiàn)在也不知道是哪里出了問(wèn)題，下次凍存的時(shí)候試試你的凍存液。不過(guò)沒(méi)有什么特制的凍存盒，不知道您講的是個(gè)什么樣的盒子。直接放泡沫盒吧。

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13樓2014-07-25 12:53:25

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10樓: Originally posted by zszhxmc at 2014-07-25 09:52:48
關(guān)于RAW264.7我之前培養(yǎng)的時(shí)候確實(shí)碰到這個(gè)問(wèn)題，如果傳代密度低的話，這個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)就不太好！...

原來(lái)大家也遇到過(guò)類似的問(wèn)題，那我再等等吧，希望能長(zhǎng)起來(lái)

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14樓2014-07-25 12:55:00

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11樓: Originally posted by 一旺百旺 at 2014-07-25 10:08:59
首先看看細(xì)胞密度，包括沒(méi)有貼壁的，大概知道你凍存的時(shí)候是不是細(xì)胞密度太低。如果太低狀態(tài)不好也正常，細(xì)胞生長(zhǎng)有一定的密度，要不生長(zhǎng)很慢。到最后細(xì)胞狀態(tài)可能也不會(huì)太好。復(fù)蘇大約五個(gè)小時(shí)以后就要看看細(xì)胞狀態(tài) ...

好的。謝謝建議，下次做的時(shí)候特別注意一下。
因?yàn)檫@個(gè)細(xì)胞有時(shí)候特別不好消化，可能我上次凍存前消化的時(shí)間長(zhǎng)了（至少3min），雖然細(xì)胞濃度挺高的但細(xì)胞狀態(tài)可能已經(jīng)不好了。
細(xì)胞房那個(gè)就離心機(jī)轉(zhuǎn)速有點(diǎn)不穩(wěn)定了，是不是也有影響啊？會(huì)有機(jī)械損傷？
復(fù)蘇的洗兩次，是要洗去DMSO嗎？它的影響特別大嗎？

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15樓2014-07-25 13:02:36

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12樓: Originally posted by 張李云 at 2014-07-25 10:51:44
同意，前一陣子，我養(yǎng)的Raw 264.7的時(shí)候也遇到同樣的問(wèn)題，稀疏，生長(zhǎng)緩慢，都想放棄了，于是有四五天沒(méi)管他們，結(jié)果反而長(zhǎng)滿了。柳暗花明的感覺(jué)。...

啊，希望我的也能這樣絕處逢生~

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16樓2014-07-25 13:03:37

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張李云

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引用回帖:

16樓: Originally posted by W格子 at 2014-07-25 13:03:37
啊，希望我的也能這樣絕處逢生~...

祝福

17樓2014-07-28 08:55:08

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小胖慫

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

你好，請(qǐng)問(wèn)能不能分一瓶RAW 264.7給我呢？謝謝啦
今天不知道為什么發(fā)不出去站內(nèi)信o(╯□╰)o

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18樓2014-10-08 10:07:14

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bbwu8802

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19樓2014-10-14 11:52:10

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日子妞兒

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【答案】應(yīng)助回帖

引用回帖:

6樓: Originally posted by W格子 at 2014-07-24 23:08:08
嗯的確是特別稀。剛復(fù)蘇的時(shí)候都不貼壁，就留下零星的一點(diǎn)細(xì)胞堅(jiān)強(qiáng)的長(zhǎng)著~
我不知道是不是我凍存的時(shí)候在4℃和-20℃放的時(shí)間太長(zhǎng)了，分別都有1h吧，對(duì)細(xì)胞有影響了？之后是-80℃12h，然后轉(zhuǎn)入液氮罐。
凍存 ...

10%的血清就夠了
這個(gè)并不是越多越好的

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我是黑妞兒哈哈

20樓2014-12-17 09:56:35

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