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RAW264.7復蘇細胞不貼壁 生長緩慢是怎么回事? 已有9人參與
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我的細胞染菌了,重新復蘇了一管。結果培養(yǎng)了一天,只有稀稀落落的很少量的細胞貼壁了,這是細胞死了的意思嗎? 我尋思可能那些未貼壁的也不會再貼壁了,就換了液(含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基),繼續(xù)培養(yǎng)了,希望貼壁的那點兒能長起來,F(xiàn)在已經繼續(xù)培養(yǎng)了兩天了,看著好像比第一天多了一點點,有些是一坨坨的,有些是單個零星的分布著,但是仍然非常少。各位前輩遇到過這情況嗎?我這可能是什么原因導致的呢?細胞還有希望長起來?我嘗試再換液含20%血清的培養(yǎng)基養(yǎng)一下行嗎? 急求指導~~ 非常感謝~~ |
Kalyan |

新蟲 (著名寫手)
金蟲 (小有名氣)

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5樓: Originally posted by 袁1231 at 2014-07-24 04:05:31 因為你的細胞太稀了,所以長的一團團的,這個長好了傳下一代密度大些,我一般都是1:5。你凍存的時候估計沒凍好,所以復蘇不行,可以把兩管放到一瓶復蘇。 嗯 的確是特別稀。 剛復蘇的時候都不貼壁,就留下零星的一點細胞堅強的長著~ 我不知道是不是我凍存的時候在4℃和-20℃放的時間太長了,分別都有1h吧,對細胞有影響了?之后是-80℃12h,然后轉入液氮罐。 凍存液是按細胞中心給的說明配的:常規(guī)培養(yǎng)液(含1%雙抗)+20%FBS+8%DMSO。 今天去看了一下,好像是長了點,但是仍然很慢 |
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4樓: Originally posted by 小毛孩24 at 2014-07-24 00:25:42 首先確定你的培養(yǎng)條件沒有問題,培養(yǎng)基里改加的都加了,培養(yǎng)基和血清都是合格的牌子和批次 然后確定你拿來復蘇的細胞沒有問題 再看看你的培養(yǎng)條件,二氧化碳還有嗎,培養(yǎng)箱的水槽還有水嗎,培養(yǎng)箱溫度控制對不對, ... 培養(yǎng)條件跟之前養(yǎng)的時候一樣,應該是沒什么問題。聽大家給分析的我覺得有可能的確是我沒凍存好。 請問您做的時候凍存步驟是怎樣的?有哪些特別關鍵的細節(jié)需要注意? 3Q~ |
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