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qinglongwang新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
為什么先使用Trans1-T1轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物，再提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)細(xì)胞里面？ 已有2人參與
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| 用全式金載體pEasy-E2轉(zhuǎn)化到大腸桿菌表達(dá)，為什么需要先使用Trans1-T1轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物，再提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)細(xì)胞里面？ |
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qinglongwang
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送紅花一朵 3樓2014-07-23 22:47:43
stone2239
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 相較于表達(dá)細(xì)胞，外源序列更易轉(zhuǎn)入Trans1，通過(guò)Trans1獲得大量重組載體，再轉(zhuǎn)化表達(dá)細(xì)胞，這樣就更容易獲得重組表達(dá)菌。這和構(gòu)建植物表達(dá)載體時(shí)，先轉(zhuǎn)化大腸桿菌，獲得陽(yáng)性菌提取質(zhì)粒后再轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌是一樣的道理。 |
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2樓2014-07-23 22:16:53
gyesang
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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大腸桿菌菌株可分為克隆菌株和表達(dá)菌株，Trans1-T1就是一個(gè)克隆菌株，用來(lái)擴(kuò)增質(zhì)粒，一般克隆菌株中endA1和RecA1酶都是敲除的，這樣使得外源質(zhì)粒適于在細(xì)菌體內(nèi)復(fù)制，而且沒(méi)有endA1，提出來(lái)的質(zhì)粒不易被降解 你說(shuō)的表達(dá)細(xì)胞應(yīng)該是表達(dá)菌株吧，常見(jiàn)的就是BL21，用來(lái)表達(dá)目的蛋白，BL21的endA1沒(méi)有敲除，所以不適合從其中提取質(zhì)粒 |
4樓2014-07-25 14:50:04
qinglongwang
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5樓2014-07-25 16:45:39
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