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巰基ssDNA連接納米金的奇怪問題，已用離心和加Nacl方法測試 已有9人參與
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大家好，我最近一直在嘗試把巰基修飾的ssDNA鏈接到13nm的納米金顆粒上。我先用Ka2CO3將檸三鈉還原法制備的13nm納米金溶液PH值調(diào)到9.5左右，加入微量PB稀釋的抗體形成不飽和的AU－抗體復(fù)合物，靜置2小時后直接加入巰基修飾的ssDNA，終濃度約為0.2uM，上搖床4度下12小時后取出。此時如果用1ml槍頭反復(fù)緩慢吸打，大約幾十次后會在槍頭處形成如照片中的深黯紅色痕跡。 為了檢查ssDNA是否的確牢固地與Au連接形成Au-S共價結(jié)合，我取樣后分成兩組進行測試，且保留了一份未加DNA的納米金(同樣加了微量抗體)作為參照，并分別做了離心和加Nacl的對比。 當(dāng)?shù)谝唤M上離心機10000rpm下10'后，發(fā)現(xiàn)無論是否加入DNA，所有的組別的底部都出現(xiàn)黑色聚集無法重懸，同時溶液中也存在有部分呈紅色的完好納米金。這應(yīng)該表明ssDNA沒有成功連接到Au上。 但是我在第二組中快速加入Nacl使終濃度達到0.3M時，發(fā)現(xiàn)未加DNA的那一份Au在1分鐘內(nèi)迅速變藍，1小時左右完全變透明，溶液內(nèi)有黑色聚集物，管壁上略有黑色吸附(照片中中間的EP管)。毫無疑問這就是Au聚集了的表現(xiàn)。 然而加了DNA的那一份Au溶液一開始沒有變化，直到2小時左右，管壁上才開始逐漸出現(xiàn)紅色吸附物，8小時后溶液變清，管壁上有大量的紅色吸附物，且無法重懸。(照片中最左邊的EP管)。所有的EP管都是進口的沒有專門做硅化，但是加了DNA與未加DNA的表現(xiàn)有很大差異，這樣的話，請教大家究竟ssDNA是成功連接上了Au呢？還是沒有成功？有什么更好辦法來確保連接成功呢？ 謝謝大家了。 照片 (2).JPG 照片 (1).JPG 照片.JPG |
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