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晴晨夕語(yǔ)新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
酶活性測(cè)定 已有1人參與
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我要測(cè)C-S lyase酶活性，文獻(xiàn)里說(shuō)：細(xì)胞破碎時(shí)，加入無(wú)菌玻璃珠然后漩渦，這個(gè)漩渦是指漩渦振蕩器嗎？ 酶反應(yīng)液：Reaction mixtures[containing 0.2 mM 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)] (DTNB),100 μM PLP, 4 mM substrate, CFEs (approximately 30 μg protein)in 100 mM potassium phosphate (pH 7.5) solution]也沒(méi)說(shuō)反應(yīng)液體積。那我應(yīng)該按多少配啊？（如果我體積少了，酶粗提取液30微克，那底物不就不夠了嗎？會(huì)影響酶的活性吧）  |
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yunshenglmm
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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最近也在做酵母體外酶活測(cè)定，看資料酵母應(yīng)該重懸在裂解緩沖液中，加等倍glassbeads，渦旋。有一種裂解緩沖液應(yīng)該適合： Breaking Buffer 50 mM sodium phosphate, pH 7.4 1 mM PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride or other protease inhibitors) 1 mM EDTA 5% glycerol 1. Prepare a stock solution of your desired protease inhibitors and store appropriately. Follow manufacturer's recommendations. 2. For 1 liter, dissolve in 900 ml deionized water: 6 g sodium phosphate (monobasic), 372 mg EDTA, and 50 ml glycerol 3. Use NaOH to adjust pH and bring up the volume to 1 liter. Store at 4°C. 4. Right before use, add the protease inhibitors. |
2樓2014-08-02 14:11:52
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