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haven00新蟲 (初入文壇)
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愈創(chuàng)木酚法過氧化物酶測定的時候產(chǎn)生了很多氣泡是否會干擾實驗的測定? 已有1人參與
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分光光度法用愈創(chuàng)木酚測定蘑菇過氧化物酶,其中反應(yīng)體系添加了3%的H2O2。在反應(yīng)中發(fā)現(xiàn)比色皿里會生成非常多的氣泡。這是正常的現(xiàn)象嗎??氣泡會不會干擾實驗的測定? 在測定OD值的時候兩分鐘以內(nèi)也保持著非?斓脑鲩L,但是在5min后可以觀察到OD值會反反復(fù)復(fù)的突然往下降,然后再緩慢上升。依我觀察下降的原因是一部分氣泡消失了,因此我猜測會不會是氣泡的原因造成了OD的迅速增加,而非產(chǎn)生了有色物質(zhì)所致。 現(xiàn)在我非常困惑,不知道大家做過氧化物酶的時候有沒有遇到過這種產(chǎn)生很多氣泡的情況,這種情況下測定出來的酶活力是不是誤差非常大?有沒有什么解決措施?請各位做酶的大蝦們不吝賜教!! ![]() ![]() |
生工檢測理論與實務(wù) |
新蟲 (初入文壇)
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金蟲 (小有名氣)
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4樓: Originally posted by haven00 at 2014-08-06 15:47:06 我們是在3ml反應(yīng)體系中添加的0.3%H2O2 2ml,這樣是不是有點多了?... 我們的體系與你們的相比較,相當(dāng)于在3ml反應(yīng)體系中只加入0.3% H2O2 0.114ml,所以你們的體系中H2O2就是多了!“反應(yīng)液:取100mM pH7.0 磷酸緩沖液 50ml,邊加熱邊加入愈創(chuàng)木酚28μl,攪拌溶解,待溶液冷卻后加入30%的H2O2 19μl,混合均勻保存于冰箱中備用;測定時,取3ml反應(yīng)液加入1ml含POD的提取液。” |
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