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求助:pCDNA3.1(+)在EPC細(xì)胞中能夠表達(dá)嗎?
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求助:pCDNA3.1(+)在EPC細(xì)胞中能夠表達(dá)嗎? 各位前輩,本人剛剛開始做真核質(zhì)粒,想構(gòu)建DNA疫苗,使用的載體是pCDNA3.1(+), 酶切位點(diǎn)為Nhe I 和Xho I,前面加了Kozak 序列 F:CG(保護(hù)性堿基)GCTAGC(Nhe I酶切位點(diǎn))ACAATGG(Kozak序列)TCCCGAAGAACATCAAGGA(目的基因含信號(hào)肽) R: CC(保護(hù)性堿基)CTCGAG(Xho I酶切位點(diǎn))TTA(終止子)ATGATGATGATGATGGTG(6*His tag)TGAATGCTGCTTTTTGG(目的基因) 轉(zhuǎn)染的四五次EPC細(xì)胞,提取mRNA,能夠檢測到目的條帶,但是WB不管是24h或36h收集上清培養(yǎng)基或者細(xì)胞都檢測不到?求各位指點(diǎn)! |

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