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瑞茲05新蟲 (初入文壇)
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本人做魚蛋白肽的，最近做時間單因素，研究水解時間對木瓜蛋白酶水解魚蛋白水解度的影響，本來設(shè)定的時間是1-5h，中間每個點間隔一個小時，發(fā)現(xiàn)水解度沒有變化，又做10min，20min,30min發(fā)現(xiàn)水解度還是沒有變化，而且數(shù)值跟之前的數(shù)值相近，現(xiàn)在做5min,10min的發(fā)現(xiàn)水解度還是不變。遂將加酶量調(diào)整為原來的十分之一，繼續(xù)試驗，做了5min,10min，30min三個水解時間對水解度的影響，還是沒有變化，我要崩潰了，我不知道增么辦了，跪求高人指點啊啊啊啊�。。。�！ |
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瑞茲05
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
瑞茲05: 金幣+8, ★★★很有幫助 2014-08-08 15:37:58
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| 恕我直言，你的思考方式就有問題，首先你做1-5h，中間每個點間隔一個小時，如果檢測方法是正確的，發(fā)現(xiàn)水解度沒有變化，這表明你的蛋白在5h還根本就沒有水解，你再做更小時間點的水解，屬于做無用功，根本更不可能水解，這個時候，你應(yīng)該考慮酶活的問題，可以調(diào)節(jié)一下各個參數(shù)，如溫度、pH（所用緩沖液）、底物濃度、激活離子濃度、酶的用量以及反應(yīng)時間，前面三個是做酶反應(yīng)時最�？紤]的三個因素；另外測定多臺是否水解可以用HPLC的方式更為簡單，用210和280nm雙波長，C18色譜柱，流動相水/甲醇梯度洗脫，這樣更為直觀，而且容易定量。希望實驗順利。 |
5樓2014-08-08 00:50:10
sugz
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8樓2014-08-08 15:31:12
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9樓2014-08-08 15:51:41
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