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水中月佳月影銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助:用間苯二酚法測(cè)植物蔗糖含量,為什么做標(biāo)曲時(shí)不顯色呢? 已有2人參與
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求助:用間苯二酚法(參考張志良的實(shí)驗(yàn)書方法)測(cè)植物蔗糖含量,為什么做標(biāo)曲時(shí)不顯色呢? 以下是我用的步驟,求大俠指導(dǎo)啊。。。 蔗糖提取與測(cè)定(采用間苯二酚法) 原理:酮糖在一定條件下和間苯二酚形成鮮紅色,在480nm波長(zhǎng)下可比色測(cè)定。在一定條件下,本反應(yīng)為酮糖所特有,故可作為酮糖測(cè)定依據(jù)。將磨碎后的植物組織用80%乙醇抽提,該提取也可用來(lái)測(cè)定蔗糖。測(cè)定時(shí)先用堿與樣品共熱,破壞其中的還原糖,然后用間苯二酚測(cè)定蔗糖中的果糖部分。色素對(duì)本實(shí)驗(yàn)影響大。 實(shí)驗(yàn)藥品:2mol/LNaOH,30%HCI(10mol/L),蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析純蔗糖100mg配成500ml溶液,即的200ug/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液),0.1%間苯二酚溶液(0.1g間苯二酚溶于100ml 95%乙醇,置棕色瓶?jī)?nèi)保存。) 步驟:吸取可溶性糖提取液0.4ml,加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷卻后加入2.8ml 30%HCI,0.8ml 0.1%間苯二酚,搖勻,80℃水浴反應(yīng)10min,冷卻后在480nm處測(cè)定OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蔗糖含量。 取標(biāo)準(zhǔn)蔗糖溶液稀釋成一系列0~100ug/ml(0、20、40、60、80、100)的不同濃度的溶液,按上述方法測(cè)OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 我做標(biāo)曲時(shí),從加入200ul 2mol/L NaOH開始和從加入2.8ml 30%HCI這兩種都試過(guò),都顯色不了,到底該怎么做呢?是蔗糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度太低了嗎?還是什么原因呢? |

新蟲 (初入文壇)
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我想測(cè)蔗糖合成酶,按指導(dǎo)書上用間苯二酚法測(cè)蔗糖,標(biāo)準(zhǔn)曲線不顯得,樣品顯色但是OD值重復(fù)的不好,想知道你們后來(lái)是怎么解決的啊 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
木蟲 (正式寫手)
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新蟲 (初入文壇)
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