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水中月佳月影銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助：用間苯二酚法測植物蔗糖含量，為什么做標曲時不顯色呢？ 已有2人參與
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求助：用間苯二酚法（參考張志良的實驗書方法）測植物蔗糖含量，為什么做標曲時不顯色呢？ 以下是我用的步驟，求大俠指導(dǎo)啊。。。 蔗糖提取與測定（采用間苯二酚法） 原理：酮糖在一定條件下和間苯二酚形成鮮紅色，在480nm波長下可比色測定。在一定條件下，本反應(yīng)為酮糖所特有，故可作為酮糖測定依據(jù)。將磨碎后的植物組織用80%乙醇抽提，該提取也可用來測定蔗糖。測定時先用堿與樣品共熱，破壞其中的還原糖，然后用間苯二酚測定蔗糖中的果糖部分。色素對本實驗影響大。 實驗藥品：2mol/LNaOH，30%HCI（10mol/L），蔗糖標準溶液（取已在80℃烘箱中烘至恒重的分析純蔗糖100mg配成500ml溶液，即的200ug/ml標準溶液），0.1%間苯二酚溶液（0.1g間苯二酚溶于100ml 95%乙醇，置棕色瓶內(nèi)保存。） 步驟：吸取可溶性糖提取液0.4ml，加入200ul 2mol/L NaOH，100℃煮沸5min，冷卻后加入2.8ml 30%HCI，0.8ml 0.1%間苯二酚，搖勻，80℃水浴反應(yīng)10min，冷卻后在480nm處測定OD值，由標準曲線計算蔗糖含量。 取標準蔗糖溶液稀釋成一系列0~100ug/ml（0、20、40、60、80、100）的不同濃度的溶液，按上述方法測OD值，繪制標準曲線。 我做標曲時，從加入200ul 2mol/L NaOH開始和從加入2.8ml 30%HCI這兩種都試過，都顯色不了，到底該怎么做呢？是蔗糖標準溶液濃度太低了嗎？還是什么原因呢？ |
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3樓2014-09-23 17:38:46
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