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xuyh3000鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
Hi-tail PCR 第一輪有條帶，第二輪有至少一條亮度很高的條帶，但是第三輪無條帶。 已有1人參與
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我一直在擴(kuò)增轉(zhuǎn)座子插入突變體側(cè)翼未知序列，參考的方法是劉老師2007年發(fā)表的 High-efficiency thermal asymmetric interlaced PCR for amplification of unknown flanking sequences 文章中的Hi-tail PCR方法，隨機(jī)兼并引物用的是文章中報(bào)道的。結(jié)果是第一輪有條帶，第二輪90%以上會出現(xiàn)一條最亮的帶，濃度很高，大小在1kb-2kb間（不知道是不是特異性的目標(biāo)帶），但是第三輪出現(xiàn)涂帶，或是能看見幾條亮度很弱的帶，重復(fù)多次，結(jié)果相同，見附圖，1 表示第一輪PCR，2 第二輪pcr，3 第三輪 pcr。也試過了換掉特異性引物，隨機(jī)引物組合的方法，結(jié)果也類似。著急�。±Щ蟀。〔恢滥奈蛔鲞^Hi-tail PCR的高手指點(diǎn)下，為什么一直會有這樣的結(jié)果？ pcr 圖.png |
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已經(jīng)有8人回復(fù)
4樓2018-05-03 14:52:11
快樂的小草
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2樓2014-12-14 17:13:32
coolthebest
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3樓2015-12-22 11:35:29
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