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zmj521good鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
構(gòu)建表達(dá)載體后要么檢測(cè)不到目的基因，要么檢測(cè)不到載體上的抗性基因
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各位大俠：最近，本人構(gòu)建表達(dá)載體總是出問(wèn)題。前提：空表達(dá)載體沒(méi)有問(wèn)題（已驗(yàn)證），自己構(gòu)建的克隆載體也沒(méi)有問(wèn)題，已經(jīng)測(cè)過(guò)序了。 將目的基因插入表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化的板上長(zhǎng)了單克隆，但是，菌落、菌液、質(zhì)粒PCR檢測(cè)后，（1）有目的基因，但是沒(méi)有載體上的抗性基因。（克隆載體和表達(dá)載體的抗性不同）；（2）有抗性基因，但是沒(méi)有目的基因。（3）終于有抗性基因也有目的基因了，轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中后，菌落、菌液、質(zhì)粒PCR檢測(cè)不到目的基因，但是能檢測(cè)到抗性基因以及載體上固定的一段。 實(shí)在不知道哪里出問(wèn)題了，急求各位大俠幫忙分析一下，謝謝�。� |
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邴紹所
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zmj521good: 金幣+1 2014-08-10 20:48:57
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 本帖僅樓主可見(jiàn) |
4樓2014-08-10 20:17:10
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