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running113木蟲 (著名寫手)
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[交流]
初生小鼠卵巢石蠟包埋制作的問題，交流交流
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最近一直在做初生小鼠（B6）的卵巢石蠟切片。關(guān)于包埋的過程，本人遇到一些問題需要解決，不知壇里大俠們有沒有解決辦法。 1：初生小鼠卵巢太小，浸酒精、二甲苯，特別是石蠟的過程中容易把卵巢弄丟，不知有何解決辦法？ 2：關(guān)鍵步驟中二甲苯的浸泡時(shí)間總是拿不準(zhǔn)，看很多碩博論文的時(shí)間大多在5至10分鐘。我在做的時(shí)候都控制在1分鐘以內(nèi)，但效果并不是很好。不知哪位大俠給解釋一下如何控制時(shí)間。 3：最后一步石蠟包埋的時(shí)間過長(zhǎng)，把卵巢組織從石蠟中取出來放在模中再倒上液態(tài)石蠟要持續(xù)2至3分鐘，組織上原來粘附的石蠟都已冷卻，雖然也能切，但總歸是影響質(zhì)量，不知如何解決。 以上是一部分內(nèi)容，不知大家在制作的過程中還遇到過什么樣的棘手問題，一起來討論一下。 已經(jīng)快兩個(gè)月了，實(shí)在是快被這個(gè)實(shí)驗(yàn)弄瘋狂了。 下圖是成年鼠的（已經(jīng)是最好的了）。后續(xù)制作不理想的圖馬上奉上，希望大家給予指正。 Frozen 10 4 01.jpg |
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running113: 金幣+1, 收到，昨天做了一下冰凍切片，效果的確不錯(cuò)。就是脫片有點(diǎn)嚴(yán)重。暫未想個(gè)好方法 2014-08-21 17:09:00
running113(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-23 20:27:41
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running113: 金幣+1, 收到，昨天做了一下冰凍切片，效果的確不錯(cuò)。就是脫片有點(diǎn)嚴(yán)重。暫未想個(gè)好方法 2014-08-21 17:09:00
running113(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-23 20:27:41
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冷切是最好的做切片方法，幾乎沒有啥影響。酒精脫水的時(shí)間這個(gè)不好說，其實(shí)也是自己把握，我們是把脫水時(shí)間弄小點(diǎn)然后把其中1，2個(gè)濃度跳過。但具體情況每次都不一樣。有時(shí)候弄的不太好，會(huì)補(bǔ)幾次。反正多做幾個(gè)平行組有好處 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
5樓2014-08-19 06:26:21
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running113: 金幣+1, 我又問的問題，不管回答與否，都感謝參與。對(duì)我的幫助很大。 2014-08-18 23:02:59
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running113: 金幣+1, 我又問的問題，不管回答與否，都感謝參與。對(duì)我的幫助很大。 2014-08-18 23:02:59
| 我們實(shí)驗(yàn)室以前有人做卵巢早衰的，基本上都不做石蠟包埋，極其難做。一半多收集幾個(gè)，直接做冷凍。石蠟也可以做但是建議你買個(gè)好一點(diǎn)的解剖鏡，在鏡下操作會(huì)好一點(diǎn)，不然要弄丟了，我們是做一個(gè)微小型包塊。二甲苯那一步盡量短一點(diǎn)。另外前面固定用的多聚甲醛最好濃度高一點(diǎn)。酒精脫水最好盡量縮短時(shí)間。 |
3樓2014-08-16 22:39:44
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