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仲尼新蟲 (小有名氣)
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[求助]
western小白求助-內(nèi)參相關(guān) 已有4人參與
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本人第一次做western，還在摸索中，希望有經(jīng)驗(yàn)的蟲友幫忙： 關(guān)于內(nèi)參的使用方法（本人可以查到的）如下，選哪種方法更合理和保險(xiǎn)呢，希望大神幫忙。 ①同時(shí)跑兩個(gè)膠，一個(gè)轉(zhuǎn)膜后，用來(lái)孵育目標(biāo)蛋白抗體；另一個(gè)轉(zhuǎn)膜后，用來(lái)孵育內(nèi)參抗體。 ②跑一個(gè)膠，轉(zhuǎn)膜后，先孵育目標(biāo)蛋白抗體。然后，直接孵育內(nèi)參抗體。 ③現(xiàn)在有專門的抗體去除液，可以實(shí)現(xiàn)用同一個(gè)膜：孵育完目標(biāo)蛋白抗體，并顯色；用去除液去除抗體，再孵育內(nèi)參抗體，顯色。 注：我的目標(biāo)蛋白是一種細(xì)胞膜蛋白，分子量有好多個(gè)27,43,47,67,55,117KDa；內(nèi)參用的是GAPDH（37KDa） 另外，我想定性我的目標(biāo)蛋白，這需要在轉(zhuǎn)完膜后將膜染色，然后跟蛋白Marker對(duì)比嗎？還是到發(fā)光那一步，目標(biāo)條帶和Marker都會(huì)跑到X光片上？ |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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4樓2014-08-18 14:28:53
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