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仲尼新蟲 (小有名氣)
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[求助]
western小白求助-內(nèi)參相關(guān) 已有4人參與
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本人第一次做western,還在摸索中,希望有經(jīng)驗的蟲友幫忙: 關(guān)于內(nèi)參的使用方法(本人可以查到的)如下,選哪種方法更合理和保險呢,希望大神幫忙。 ①同時跑兩個膠,一個轉(zhuǎn)膜后,用來孵育目標(biāo)蛋白抗體;另一個轉(zhuǎn)膜后,用來孵育內(nèi)參抗體。 ②跑一個膠,轉(zhuǎn)膜后,先孵育目標(biāo)蛋白抗體。然后,直接孵育內(nèi)參抗體。 ③現(xiàn)在有專門的抗體去除液,可以實現(xiàn)用同一個膜:孵育完目標(biāo)蛋白抗體,并顯色;用去除液去除抗體,再孵育內(nèi)參抗體,顯色。 注:我的目標(biāo)蛋白是一種細(xì)胞膜蛋白,分子量有好多個27,43,47,67,55,117KDa;內(nèi)參用的是GAPDH(37KDa) 另外,我想定性我的目標(biāo)蛋白,這需要在轉(zhuǎn)完膜后將膜染色,然后跟蛋白Marker對比嗎?還是到發(fā)光那一步,目標(biāo)條帶和Marker都會跑到X光片上? |
新蟲 (初入文壇)
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