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落木瀟瀟sky鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
連接轉(zhuǎn)化 已有4人參與
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| lz本科實驗菜鳥一枚，現(xiàn)在在做茶花的its�，F(xiàn)在遇到問題，所有的程序都按照說明書操作的，連接試劑是TAKARA的，生工的提取試劑盒，膠回收試劑盒，菌用的是DH5α。可是最后AMP上就是不長菌，感受態(tài)涂LB是長菌的。懷疑連接轉(zhuǎn)化有問題，可是無從下手，求指教！ |
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ncuduhan
銀蟲 (正式寫手)
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2樓2014-08-17 11:14:01
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wangranjun
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4樓2014-08-17 15:12:12
Lylissa
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
落木瀟瀟sky(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-17 20:31:50
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
落木瀟瀟sky(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-08-17 20:31:50
| 你所連接的重組質(zhì)粒是否是抗氨芐AMP的，氨芐與LB培養(yǎng)基的比例一般為1：:1000，另外可能與你連接所用的酶切載體和片段濃度有關(guān)，酶切2ng的載體和1ng的片段后，在10ul的連接體系里，加2ul酶切載體和6ul酶切片段試試，另外做個空白對照吧，就是加2ul酶切載體和6ul ddH2O作為空白連接。 T4 DNA連接酶的話，連接4~6h就可以連上了，轉(zhuǎn)化的時候避免反復(fù)用槍頭吹打DH5α. |
5樓2014-08-17 16:07:11
落木瀟瀟sky
鐵蟲 (初入文壇)
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6樓2014-08-28 09:56:21
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