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[交流]
有木有誰建立細胞株的呀，求經驗
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| 將目的基因導入腫瘤細胞建立穩(wěn)定表達該基因的細胞株，用藥物G418進行篩選，但是效果不理想，在進行兩次加藥處理（約三天）后，對照組細胞（沒有轉染目的質粒的）竟然比實驗組還多，這是為什么呢，求解，我按照之前老師做過的，細胞百分之八十進行轉染，二十四小時后換液，二十四小時后加藥篩選的。 |
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13樓2014-08-17 16:00:45
14樓2014-08-17 16:40:44
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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1 不同細胞株對G418的耐受濃度時不一樣的，即使相同細胞株，在不同實驗室的耐受濃度也不會完全一致，更何況G418B不同廠家，不同批次的活性都是不一樣的。所以在篩選之前，要摸索細胞株對G418的耐受濃度，一般是找連續(xù)培養(yǎng)2周，細胞剛好全死的濃度。 2 3天是看不出效果的，G418是抑制蛋白的合成，人如果2天不吃蛋白，只吃糖類，也不會死的。細胞也一樣。3天就死，你也小看生命的韌性了。 3 對照組細胞（沒有轉染目的質粒的）竟然比實驗組還多，可能的原因，如果G418的時間和濃度都很低，就不考慮G418的毒性。對照組的質粒少了目的基因，要產生的蛋白就少，代謝負荷就小，長得當然快了！ |
15樓2014-08-17 16:45:30
16樓2014-08-17 17:15:32
簡單回復
2014-08-17 12:28
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14_812(金幣+1): 謝謝參與
dmbb5樓
2014-08-17 12:31
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2014-08-17 12:48
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tableman7樓
2014-08-17 12:52
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ma-yue9樓
2014-08-17 13:26
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chyzm10樓
2014-08-17 14:07
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14_812(金幣+1): 謝謝參與
唐tjg11樓
2014-08-17 14:12
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14_812(金幣+1): 謝謝參與
14_81217樓
2014-08-17 17:16
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