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阿修羅Axuro金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
十分詭異的電泳問(wèn)題，困擾太久了，求各位幫忙 已有8人參與
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蟲(chóng)子我做DNA電泳接近4年了，從來(lái)沒(méi)失過(guò)手，大家可能會(huì)想這是一個(gè)很簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，怎么會(huì)有問(wèn)題呢？我也是這么想的。所以我?guī)熋贸隽藛?wèn)題后，我以為很簡(jiǎn)單就能解決，誰(shuí)料我親自上陣，搞了好久問(wèn)題依舊。真是一世英名毀于這個(gè)入門(mén)實(shí)驗(yàn)手上，晚節(jié)不保啊！這不想起了小木蟲(chóng)，特來(lái)求助。 言歸正傳：?jiǎn)栴}：見(jiàn)圖片，不管怎么跑，MARKER都是這個(gè)鬼樣子，一開(kāi)始還只有低于500BP的marker出現(xiàn)這樣的情況，后面越來(lái)越嚴(yán)重，所有的都這樣了。 那么問(wèn)題很簡(jiǎn)單，我當(dāng)然不會(huì)簡(jiǎn)單的就來(lái)求助，我嘗試過(guò)哪些解決辦法呢？ 一，換電泳Buffer。對(duì)師妹不放心，親自配置新鮮的Buffer，問(wèn)題依舊。 二，新買(mǎi)Marker。 這換了Buffer沒(méi)用，難道Mraker太久了，出問(wèn)題了？買(mǎi)了倆支新Mraker，一支takara的，一支fermentas的。問(wèn)題依舊。 三，新買(mǎi)瓊脂糖。 沒(méi)辦法，懷疑瓊脂糖有問(wèn)題，新買(mǎi)了一瓶BIOWEST的瓊脂糖。問(wèn)題依舊。 四，新買(mǎi)染料。 我們實(shí)驗(yàn)室用的是Biotum的gelred，買(mǎi)了大概有大半年了，懷疑染料出了問(wèn)題，買(mǎi)一支新的。問(wèn)題依舊。 五，換電泳儀。 難道電泳儀老化，電壓不穩(wěn)？換另一個(gè)一直在跑蛋白偶爾也跑跑中性PAGE的電泳儀（一直正常運(yùn)行）。問(wèn)題依舊。 神啊，都換得差不多了，還是老樣子，這可如何是好？  難道是我加熱的姿勢(shì)不對(duì)？微波爐加熱和電磁爐加熱會(huì)有區(qū)別嗎？明天試試。20140825.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
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阿修羅Axuro: 金幣+5, ★有幫助, 感謝幫助，問(wèn)題已經(jīng)解決，另發(fā)一貼在分子生物板塊。謝謝 2014-08-28 16:16:44
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| 樓主把可能的問(wèn)題想的已經(jīng)比較全面了，可問(wèn)題依舊。最后問(wèn)到了做膠時(shí)的加熱方法，這個(gè)雖說(shuō)不是很關(guān)鍵，但是請(qǐng)問(wèn)樓主你出問(wèn)題之前用的什么加熱？期間換了嗎？因?yàn)槿绻訜岘傊菚r(shí)瓶子敞口，會(huì)導(dǎo)致水分蒸發(fā)，加熱時(shí)間越長(zhǎng)蒸發(fā)越嚴(yán)重，導(dǎo)致凝膠內(nèi)緩沖液濃度升高，如果高出電泳緩沖液濃度太多，會(huì)影響電泳效果，建議考慮下這個(gè)因素。 |
9樓2014-08-26 21:25:26
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