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[求助] 求助鏈霉親和素包被問題！

各位戰(zhàn)友，本人做親和素包被遇到問題，現(xiàn)將問題描述如下，求各位點(diǎn)撥。非常感激！
技術(shù)路線：
第一步：在corning 高吸附酶標(biāo)板上包被5ug/ml親和素
第二步：加生物標(biāo)記DNA
第三步：加蛋白和DNA反應(yīng)
第四步：加和蛋白反應(yīng)的his6 HRP抗體

封閉液用的roche 封閉液，之前用索萊寶公司的親和素包被，整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果較好。后改換成amresco親和素以及索萊寶新批次的親和素后，背景值超高，OD絕對值達(dá)2.多。
背景值產(chǎn)生條件：
1.技術(shù)路線步驟中不加DNA，
2.技術(shù)路線步驟中不加蛋白，
3.將親和素包被，封閉后，直接加HRP標(biāo)記抗體。

用之前做出結(jié)果的親和素得到的這3種背景值最多不超過0.2.而現(xiàn)在的生物素所得OD值很高。曾將索萊寶親和素和amresco在同一酶標(biāo)板操作，前者所得結(jié)果正常。請問戰(zhàn)友：
1.知不知道哪家的親和素用于包被背景低？
2.看下我的包被是否有問題？
3.能不能介紹好一些的包被方法。
再次感謝！

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1樓 2014-09-02 17:01:51

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