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西交田苗新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助指點(diǎn)HRP-TMB電化學(xué)體系的相關(guān)問(wèn)題 已有1人參與
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我在做電化學(xué)檢測(cè)，用的體系是HRP-TMB體系，先將HRP捕獲在電極表面，然后在TMB-H2O2底物溶液中進(jìn)行計(jì)時(shí)電流檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到很多問(wèn)題，希望做過(guò)的前輩分析指點(diǎn)。 1.電化學(xué)中的TMB-H2O2的配方是否與比色檢測(cè)中的配方一樣？我使用的配方為TMB（1mg/mL,DMSO）:緩沖液（0.1M檸檬酸，0.2M磷酸氫二鈉，pH4.9）：H2O2（30%）=100:900:1，但我看近些年發(fā)表的利用TMB-H2O2進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)的比較高檔的文章基本都用的是Neogen公司的K-bule低活性底物溶液（含H2O2），不知道這跟自己配的有什么區(qū)別？ 2.實(shí)驗(yàn)中，我是將3uL 0.5U/mL的HRP滴加到電極上，捕獲之后沖洗，然后將電極浸入到TMB-H2O2底物中進(jìn)行檢測(cè)。所以檢測(cè)之前我先對(duì)HRP與該底物溶液之間的反應(yīng)進(jìn)行了評(píng)估，即將3uL 0.5U/mL的HRP直接加入到底物溶液中進(jìn)行測(cè)量，但是產(chǎn)生的電流非常�。�40nA）左右，這比文獻(xiàn)中的檢測(cè)背景電流還要低，而且我將HRP的量提高到兩三倍時(shí)，電流值并沒(méi)有升高，提高到100倍時(shí)，電流值才升高了幾倍（但產(chǎn)生的顏色隨著HRP的增強(qiáng)而變深，可以排除HRP活性的問(wèn)題），請(qǐng)問(wèn)這有可能是什么原因造成的？ 3.HRP加入到底物中后需要反應(yīng)一段時(shí)間再進(jìn)行電流測(cè)試還是立即測(cè)試？底物是一次性的還是可以重復(fù)進(jìn)行多次電流測(cè)試？ 4.進(jìn)行電化學(xué)檢測(cè)之后底物溶液應(yīng)該是藍(lán)色還是無(wú)色？ 希望大家不吝賜教，非常感謝��！ |
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