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succre新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
Genome Walking 的準(zhǔn)確性,片段連接上但不一定是對(duì)的?
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最近做染色體步移擴(kuò)增未知序列,出現(xiàn)一些匪夷所思的問(wèn)題想和各位高手探討一下. 比如通過(guò)TAKARA walking的試劑盒擴(kuò)增出來(lái)的兩個(gè)片段能與已知的片段拼接上(至少160+bp是重的),按道理這兩個(gè)片段都是對(duì)的,但這兩個(gè)片段(長(zhǎng)度不一樣)進(jìn)行比對(duì)的時(shí)候,可能前面400是重疊的后面就不一樣了,還有的是只有中間不對(duì),還有的是只與原已知序列拼接上的那部分序列是重疊的,后面就不對(duì)了... 不知道這是什么情況,現(xiàn)在懷疑walking的準(zhǔn)確性,到底得到的哪個(gè)片段才是真的? 不知道我講清楚沒(méi)有,希望有高手能夠解答一下  walking 序列對(duì)比圖.PNG |
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Cynthiaxin
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- 專(zhuān)業(yè): 細(xì)胞死亡
2樓2014-09-21 02:00:34
3樓2018-05-03 14:49:06
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
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你的估計(jì)是P出來(lái)錯(cuò)誤序列了，樓主的那個(gè)可能是兩個(gè)同源基因。建議你重新做吧，takara genmone walking克隆需要運(yùn)氣，重點(diǎn)在于引物的設(shè)計(jì)，還有一些其他的克隆方法你可以試試， 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
4樓2018-05-03 17:40:02
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