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[求助]
離子交換過程中的困惑，算是交流吧，希望大家積極發(fā)言 已有4人參與
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我的蛋白是包涵體溶解后的變性蛋白直接用Q柱純化，在兩個(gè)鹽濃度下都有目的蛋白洗脫下來（如圖），我的困惑是：同一個(gè)蛋白為什么會(huì)在兩個(gè)不同的鹽濃度下洗脫下來？ 從電泳圖上看，高濃度鹽洗下來的蛋白要雜一些，會(huì)不會(huì)是這些目的蛋白和雜蛋白聚集在一起了，這樣他們帶的電荷要高一些，洗脫就要晚一些呢。 我的緩沖液里有8M urea和70mM 2-Me，脲的話主要是對(duì)蛋白的氫鍵作用，巰基乙醇是二硫鍵，除了這兩個(gè)鍵以外能使蛋白聚集在一起的就剩疏水鍵了。如果是疏水鍵作用加什么東西比較好呢。陰離子型的去垢劑肯定不行，另外，低溫也不太好，一是因?yàn)槲矣玫氖莗H8.0 Tris-HCl緩沖液，二是因?yàn)榈蜏叵?M脲容易結(jié)晶。 這種情況不知道大家有沒有遇見過，我的分析不知道對(duì)不對(duì)，希望這里的大神們可以給一些建議，討論一下。 未命名.jpg |
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zwt369
銅蟲 (小有名氣)
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2樓2014-09-29 10:29:02
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4樓2014-09-30 14:33:03
pennchem
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5樓2014-09-30 19:46:36
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