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ddz_19897金蟲 (正式寫手)
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[求助]
pEGFP-N1空載體用xhoI、NheI單酶切或者雙酶切都切不開？
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我最近在做一個(gè)實(shí)驗(yàn)，把目的基因從已有載體上切下來，連到新的載體上，遇到一些問題，求助于各位： 1. pEGFP-N1空載體大小是4.7kb，跑膠可以看到兩條帶，一條在實(shí)際大小位置，亮度很低，另一條在2kb多，很亮。 2. pEGFP-N1空載體用xhoI、NheI單酶切或者雙酶切都切不開或者酶切效率特別低，切完跑膠發(fā)現(xiàn)條帶與未切的幾乎一樣。 3. 回收實(shí)際大小位置較暗的條帶，測濃度只有3ng/ul�；厥漳康幕驕y濃度15ng/ul，連接后轉(zhuǎn)化涂板沒有長菌。 根據(jù)以上情況，我想求助的問題是：1. 載體跑出來的條帶是正常的吧？ 2. 不論是單酶切還是雙酶切，如果能切開，實(shí)際大小位置的條帶應(yīng)該更亮，對(duì)嗎？ 3. 沒有長菌是說明回收的條帶是切開了嗎？ 不甚感激。 |
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